本試驗(yàn)旨在研究丁酸梭菌及其磷壁酸對(duì)腸道細(xì)胞作用的分子機(jī)制。以人體結(jié)腸腺癌細(xì)胞HT-29細(xì)胞為試驗(yàn)對(duì)象,將其接種于六孔板上。TX-114法提取丁酸梭菌的磷壁酸,利用紅外光譜(IR)及核磁共振氫譜(NMR)檢測(cè)提取磷壁酸的純度；分別用濃度為0,50μg/mL、80μg/mL的磷壁酸處理細(xì)胞24h后,加入FITC標(biāo)記的濃度為109CFU/mL的丁酸梭菌,孵育2h后,于熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)菌的粘附情況；分別用濃度為0、10CFU/mL、103CFU/mL、105CFU/mL、107CFU/mL、109CFU/mL的丁酸梭菌以及濃度為0.10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的磷壁酸處理HT-29細(xì)胞12h,Trizol法提取細(xì)胞總RNA,反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,利用RT-PCR技術(shù)分析IL-6、IL-8、IL-10、Hsp、TNF-α、NF-κB等免疫因子的表達(dá)水平；分別用濃度為0、10CFU/mL、103CFU/mL、105CFU/mL、107CFU/mL、109CFU/mL的丁酸梭菌以及濃度為0、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、80μ...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 腸道微生物與宿主的關(guān)系
        1.1.2 腸道微生物對(duì)宿主腸道免疫及發(fā)育的影響
        1.1.3 腸道微生物對(duì)宿主腸道炎癥的影響
        1.1.4 腸道微生物對(duì)宿主代謝的影響
    1.2 丁酸梭菌的應(yīng)用研究進(jìn)展
        1.2.1 丁酸梭菌簡(jiǎn)介
        1.2.2 丁酸梭菌的生物學(xué)作用
        1.2.3 丁酸梭菌在治療人類疾病方面的應(yīng)用
        1.2.4 丁酸梭菌在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用
        1.2.5 丁酸梭菌作用機(jī)理分析
        1.2.6 丁酸梭菌應(yīng)用中存在的問題
    1.3 磷壁酸的研究進(jìn)展
        1.3.1 磷壁酸對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的作用
        1.3.2 磷壁酸的生物合成
    1.4 研究?jī)?nèi)容和路線
2 材料與方法
    2.1 丁酸梭菌磷壁酸的提取、純化
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.1.3 測(cè)定方法
        2.1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2.2 磷壁酸對(duì)丁酸梭菌與HT-29細(xì)胞粘附率的影響
        2.2.1 試驗(yàn)材料
        2.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.2.3 測(cè)定方法
        2.2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 丁酸梭菌及其磷壁酸對(duì)腸道細(xì)胞免疫因子mRNA表達(dá)量的影響
        2.3.1 試驗(yàn)材料
        2.3.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.3.3 測(cè)定方法
        2.3.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 丁酸梭菌及其磷壁酸對(duì)HT-29細(xì)胞外蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響
        2.4.1 試驗(yàn)材料
        2.4.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.4.3 測(cè)定方法
        2.4.4 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 磷壁酸的提取、純化
    3.2 磷壁酸對(duì)丁酸梭菌與HT-29細(xì)胞粘附率的影響
    3.3 丁酸梭菌及其磷壁酸對(duì)腸道細(xì)胞免疫因子mRNA表達(dá)水平的影響
        3.3.1 丁酸梭菌及其磷壁酸對(duì)IL-8、IL-6、TNF-α表達(dá)水平的影響
        3.3.2 丁酸梭菌及其磷壁酸對(duì)HT-29細(xì)胞IL-10、Hsp70表達(dá)水平的影響
        3.3.3 丁酸梭菌及其磷壁酸對(duì)HT-29細(xì)胞NF-κB表達(dá)水平的影響
    3.4 丁酸梭菌及其磷壁酸對(duì)HT-29細(xì)胞外蛋白質(zhì)表達(dá)量的影響
        3.4.1 丁酸梭菌對(duì)細(xì)胞外蛋白質(zhì)IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α表達(dá)量的影響
        3.4.2 磷壁酸對(duì)細(xì)胞外蛋白質(zhì)IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α表達(dá)量的影響
4 討論
    4.1 磷壁酸的提取、純化
    4.2 磷壁酸對(duì)丁酸梭菌與HT-29細(xì)胞粘附率的影響
    4.3 丁酸梭菌及其磷壁酸對(duì)腸道細(xì)胞免疫因子表達(dá)量的影響
5 結(jié)論與展望
    5.1 總體結(jié)論
    5.2 課題創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 有待進(jìn)一步解決的問題
6 參考文獻(xiàn)
7 致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3830351