本試驗旨在研究丁酸梭菌及其磷壁酸對腸道細胞作用的分子機制。以人體結腸腺癌細胞HT-29細胞為試驗對象,將其接種于六孔板上。TX-114法提取丁酸梭菌的磷壁酸,利用紅外光譜(IR)及核磁共振氫譜(NMR)檢測提取磷壁酸的純度；分別用濃度為0,50μg/mL、80μg/mL的磷壁酸處理細胞24h后,加入FITC標記的濃度為109CFU/mL的丁酸梭菌,孵育2h后,于熒光倒置顯微鏡下觀察細菌的粘附情況；分別用濃度為0、10CFU/mL、103CFU/mL、105CFU/mL、107CFU/mL、109CFU/mL的丁酸梭菌以及濃度為0.10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的磷壁酸處理HT-29細胞12h,Trizol法提取細胞總RNA,反轉錄得到cDNA,利用RT-PCR技術分析IL-6、IL-8、IL-10、Hsp、TNF-α、NF-κB等免疫因子的表達水平；分別用濃度為0、10CFU/mL、103CFU/mL、105CFU/mL、107CFU/mL、109CFU/mL的丁酸梭菌以及濃度為0、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、80μ...

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 腸道微生物與宿主的關系
        1.1.2 腸道微生物對宿主腸道免疫及發(fā)育的影響
        1.1.3 腸道微生物對宿主腸道炎癥的影響
        1.1.4 腸道微生物對宿主代謝的影響
    1.2 丁酸梭菌的應用研究進展
        1.2.1 丁酸梭菌簡介
        1.2.2 丁酸梭菌的生物學作用
        1.2.3 丁酸梭菌在治療人類疾病方面的應用
        1.2.4 丁酸梭菌在動物生產中的應用
        1.2.5 丁酸梭菌作用機理分析
        1.2.6 丁酸梭菌應用中存在的問題
    1.3 磷壁酸的研究進展
        1.3.1 磷壁酸對革蘭氏陽性菌的作用
        1.3.2 磷壁酸的生物合成
    1.4 研究內容和路線
2 材料與方法
    2.1 丁酸梭菌磷壁酸的提取、純化
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗設計
        2.1.3 測定方法
        2.1.4 統(tǒng)計分析
    2.2 磷壁酸對丁酸梭菌與HT-29細胞粘附率的影響
        2.2.1 試驗材料
        2.2.2 試驗設計
        2.2.3 測定方法
        2.2.4 統(tǒng)計分析
    2.3 丁酸梭菌及其磷壁酸對腸道細胞免疫因子mRNA表達量的影響
        2.3.1 試驗材料
        2.3.2 試驗設計
        2.3.3 測定方法
        2.3.4 統(tǒng)計分析
    2.4 丁酸梭菌及其磷壁酸對HT-29細胞外蛋白質表達量的影響
        2.4.1 試驗材料
        2.4.2 試驗設計
        2.4.3 測定方法
        2.4.4 統(tǒng)計分析
3 結果與分析
    3.1 磷壁酸的提取、純化
    3.2 磷壁酸對丁酸梭菌與HT-29細胞粘附率的影響
    3.3 丁酸梭菌及其磷壁酸對腸道細胞免疫因子mRNA表達水平的影響
        3.3.1 丁酸梭菌及其磷壁酸對IL-8、IL-6、TNF-α表達水平的影響
        3.3.2 丁酸梭菌及其磷壁酸對HT-29細胞IL-10、Hsp70表達水平的影響
        3.3.3 丁酸梭菌及其磷壁酸對HT-29細胞NF-κB表達水平的影響
    3.4 丁酸梭菌及其磷壁酸對HT-29細胞外蛋白質表達量的影響
        3.4.1 丁酸梭菌對細胞外蛋白質IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α表達量的影響
        3.4.2 磷壁酸對細胞外蛋白質IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α表達量的影響
4 討論
    4.1 磷壁酸的提取、純化
    4.2 磷壁酸對丁酸梭菌與HT-29細胞粘附率的影響
    4.3 丁酸梭菌及其磷壁酸對腸道細胞免疫因子表達量的影響
5 結論與展望
    5.1 總體結論
    5.2 課題創(chuàng)新點
    5.3 有待進一步解決的問題
6 參考文獻
7 致謝
攻讀學位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3830351