生殖細胞是遺傳物質(zhì)的傳遞者,人類和家畜優(yōu)良性狀的遺傳都要通過生殖細胞來實現(xiàn),因此生殖細胞的發(fā)生也就成為當前生殖生物學(xué)研究的熱點之一。然而迄今為止,我們對生殖細胞發(fā)育和分化的了解還知之甚少,而干細胞為研究生殖細胞的發(fā)育提供了極為有利的工具。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是一群存在于骨髓中具有不斷增殖和自我更新能力的成體干細胞,已在多個物種證明該類干細胞具有體外分化為3個胚層諸多細胞類型的能力,可見BMSCs在分化潛能上幾乎可以與ES細胞相媲美。但與ES細胞相比,BMSCs具有取材方便、體外易培養(yǎng)、增殖快和免疫原性低等優(yōu)點,是生殖細胞發(fā)育分化和基因表達調(diào)控的理想種子細胞之一。因此,本試驗以體外分離培養(yǎng)的山羊BMSCs作為細胞模型,研究不同的外源因子(視黃酸RA和骨形態(tài)蛋白BMP4)和內(nèi)源因子(DAZL基因)誘導(dǎo)BMSCs向早期生殖細胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化,為研究哺乳動物生殖細胞的發(fā)生及機理建立可靠的模型。本研究共分為三個部分,第一部分為RA和BMP4體外誘導(dǎo)山羊BMSCs向早期生殖細胞分化；第二部分為過表達DAZL基因體外誘導(dǎo)山羊BMSCs向早...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞(Abbreviation)
引言
第一章 雄性生殖細胞的發(fā)生過程及內(nèi)在機理的研究進展
    1.1 研究生殖細胞的必要性
    1.2 雄性生殖細胞的發(fā)生過程
    1.3 性別確定,減數(shù)分裂和生殖細胞成熟
    1.4 生殖細胞系的表觀修飾學(xué)
    1.5 RNA結(jié)合蛋白和小非編碼RNA對轉(zhuǎn)錄后的調(diào)節(jié)
    1.6 結(jié)論和展望
    參考文獻
第二章 干細胞向生殖細胞分化的研究進展
    1.1 干細胞簡介
    1.2 ESCs或者iPSCs向生殖細胞分化的研究進展
    1.3 成體干細胞向生殖細胞分化的進展
    1.4 誘導(dǎo)分化的方法總結(jié)
        1.4.1 RA的誘導(dǎo)
        1.4.2 生長因子
        1.4.3 模擬體內(nèi)微環(huán)境
        1.4.4 過表達相關(guān)基因
    1.5 結(jié)論和展望
    參考文獻
第三章 RA和BMP4對山羊骨髓間充質(zhì)干細胞向生殖細胞體外分化的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 試驗方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 RA的濃度的優(yōu)化
        2.2 BMP4濃度的優(yōu)化
        2.3 誘導(dǎo)前后細胞形態(tài)
        2.4 不同的誘導(dǎo)組合后的基因表達檢測
        2.5 誘導(dǎo)過程中基因的表達情況
    3 討論
    參考文獻
第四章 過表達DAZL對山羊BMSCs向生殖細胞分化的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 不同日齡的山羊睪丸組織DAZL的表達
        2.2 體外轉(zhuǎn)錄mRNA的驗證
        2.3 過表達DAZL后對體外轉(zhuǎn)分化的影響
        2.4 DAZL敲低對RA誘導(dǎo)BMSCs體外分化的影響
    4 討論
    參考文獻
第五章 山羊早期生殖細胞特異報告載體pVASA-EGFP的構(gòu)建及表達研究
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 山羊VASA基因序列的擴增
        2.2 pVASA-EGFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.3 pVASA-EGFP重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染及誘導(dǎo)后的熒光觀察
    3 討論
參考文獻
全文結(jié)論
創(chuàng)新點
附錄
致謝
發(fā)表文章



本文編號：3826416