豬繁殖與呼吸綜合征是動物二類傳染病,俗稱藍耳病,可通過個體接觸、污染物和空氣傳播。PRRS現(xiàn)已成為規(guī)�；B(yǎng)豬場的主要疫病之一,給世界養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成了重大的經(jīng)濟損失。豬繁殖與呼吸綜合征病毒顆粒呈橢球體,由囊膜包裹,直徑在50⁷4 nm之間。根據(jù)病毒基因序列和抗原性等方面的差異,又將其分為基因Ⅰ型和基因Ⅱ型。PRRSV因其抑制先天性免疫應答的能力,目前仍然是嚴重危脅養(yǎng)豬業(yè)安全的病原之一。研究表明,獲得性免疫應答反應在PRRSV感染的機體內(nèi)起著關鍵性的免疫保護作用,而PRRSV GP2蛋白不僅是病毒侵染宿主細胞的必要結構蛋白,還能引起宿主產(chǎn)生明顯的獲得性免疫應答。本研究通過合成GP2蛋白的重疊多肽,采用間接ELISA和IFN-γELISPOT的方法篩選并得到了GP2蛋白3個B細胞表位和6個T細胞表位,為新型表位疫苗的研究提供幫助。將實驗室保存的PRRSV JXA1-R毒株進行擴增,根據(jù)Reed-Muench兩氏法測定其病毒滴度為10⁶.6.6 TCID₅₀/mL。提取JXA1-R毒株總RNA并逆轉錄成cDNA,以cDNA為模板擴...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻綜述
    1.1 PRRSV的危害
    1.2 PRRSV的分子病原學
        1.2.1 形態(tài)結構及理化性質
        1.2.2 PRRSV的基因組構成
        1.2.3 PRRSV的主要結構蛋白
        1.2.4 PRRSV的次要囊膜蛋白
    1.3 PRRSV的流行病學概述
        1.3.1 PRRSV的傳播途徑
        1.3.2 PRRSV的宿主特異性
        1.3.3 PRRSV的感染特征
    1.4 PRRSV感染誘導的特異性免疫應答反應
        1.4.1 體液免疫
        1.4.2 細胞免疫
    1.5 PRRS的防控及診斷
        1.5.1 PRRS的防控
        1.5.2 PRRS的診斷
    1.6 抗原表位研究進展
        1.6.1 PRRSV結構蛋白T細胞表位研究現(xiàn)狀
        1.6.2 PRRSV結構蛋白B細胞表位研究現(xiàn)狀
    1.7 研究目的及意義
2 PRRSVGP2蛋白基因擴增及原核表達
    2.1 試驗材料
        2.1.1 病毒株、載體、菌株和細胞
        2.1.2 試驗試劑及試劑盒
        2.1.3 主要試驗儀器與耗材
        2.1.4 試劑配制方法
    2.2 試驗方法
        2.2.1 PRRSVJXA1-R毒株擴繁
        2.2.2 病毒感染力測定
        2.2.3 ORF2目的基因獲取
        2.2.4 克隆載體構建并回收測序
        2.2.5 GP2蛋白原核表達載體構建
        2.2.6 GP2蛋白的表達純化與鑒定
    2.3 試驗結果
        2.3.1 病毒感染力測定
        2.3.2 ORF2目的基因獲取
        2.3.3 ORF2克隆載體鑒定并測序
        2.3.4 GP2蛋白表達載體構建
        2.3.5 GP2蛋白的表達純化及WesternBlot鑒定
    2.4 討論
    2.5 小結
3 PRRSVGP2蛋白B細胞、T細胞表位篩選
    3.1 試驗材料
        3.1.1 病毒株和試驗動物
        3.1.2 試驗試劑及試劑盒
        3.1.3 主要試驗儀器與耗材
        3.1.4 試劑配制方法
    3.2 試驗方法
        3.2.1 試驗豬PRRSV抗體檢測
        3.2.2 試驗動物免疫
        3.2.3 分離血清樣品與外周血單核細胞
        3.2.4 GP2蛋白抗體檢測
        3.2.5 GP2蛋白重疊多肽設計
        3.2.6 GP2蛋白B細胞表位篩選
        3.2.7 B細胞表位保守性分析
        3.2.8 GP2蛋白T細胞表位篩選
    3.3 試驗結果
        3.3.1 試驗豬PRRSV抗體檢測
        3.3.2 GP2蛋白抗體水平檢測
        3.3.3 GP2蛋白重疊多肽合成
        3.3.4 GP2蛋白B細胞表位篩選
        3.3.5 B細胞表位保守性分析
        3.3.6 GP2蛋白T細胞表位篩選
    3.4 討論
    3.5 小結
4 結論
參考文獻
附錄 英文縮略詞表
致謝
個人簡歷



本文編號：3823394