為研究牦牛適應(yīng)高原低氧環(huán)境的分子機(jī)制，本試驗(yàn)以帕里牦牛、甘南牦牛、大通牦牛、天祝牦牛為研究對(duì)象，分別對(duì)MMP3、ADAM17和ARG2基因的外顯子區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。運(yùn)用混合DNA池測(cè)序技術(shù)結(jié)合HRM基因分型技術(shù)，分析了牦牛MMP3、ADAM17和ARG2基因特異性SNPs的遺傳變異。最后應(yīng)用SHEsis軟件統(tǒng)計(jì)分析，以期發(fā)現(xiàn)SNPs與牦牛高原適應(yīng)性的相關(guān)性。從而篩選出牦牛適應(yīng)高原低氧環(huán)境的分子信標(biāo)，為進(jìn)一步研究牦牛高原低氧適應(yīng)機(jī)制提供一定的理論依據(jù)。 本研究主要取得了以下結(jié)果： 1.在牦牛MMP3基因中檢測(cè)到2個(gè)特異性SNPs（rs2977G→A和rs4331C→G），基因分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在4個(gè)牦牛群體中，均以GG型和CC型為優(yōu)勢(shì)基因型；對(duì)4個(gè)牦牛群體進(jìn)行單倍型分析，單倍型GC在各牦牛群體中的頻率極顯著高于其他單倍型的頻率。推測(cè)單倍型GC牦牛更能適應(yīng)低氧環(huán)境，MMP3基因可以作為牦牛適應(yīng)高原低氧環(huán)境的分子信標(biāo)。 2.在牦牛ADAM17基因中檢測(cè)到2個(gè)特異性SNPs（rs21928G→A和rs38991A→G），基因分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在4個(gè)牦牛群體中，均以GG型和AA型為優(yōu)勢(shì)基因型；對(duì)各牦牛群...

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
SUMMARY
縮略表
前言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 牦牛概述
        1.1 牦牛的分類及分布
            1.1.1 牦牛的分類
            1.1.2 牦牛的分布
        1.2 牦牛適應(yīng)高原環(huán)境的生物學(xué)特征
            1.2.1 牦牛的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與低氧適應(yīng)性
            1.2.2 牦牛肺臟的組織結(jié)構(gòu)與低氧適應(yīng)性
            1.2.3 牦牛血液學(xué)特性與低氧適應(yīng)性
    2 MMP3 基因的研究進(jìn)展
        2.1 MMP3 概述
        2.2 MMP3 的生物學(xué)特點(diǎn)
        2.3 MMP3 的功能
        2.4 MMP3 的活性調(diào)節(jié)
    3 ADAM17 基因的研究進(jìn)展
        3.1 ADAM17 概述
    4 ARG2 基因的研究進(jìn)展
        4.1 ARG2 概述
    5 低氧誘導(dǎo)因子研究進(jìn)展
        5.1 低氧誘導(dǎo)因子-1a（HiF-1a）概述
        5.2 HiF-1 結(jié)構(gòu)與功能
        5.3 HiF-1 調(diào)節(jié)機(jī)制
        5.4 HIF-1 的作用機(jī)制
    6 HRM 分型法概述
    7 研究目的和意義
第二部分 材料與方法
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 血液樣品的采集
    2 主要儀器設(shè)備
    3 主要試劑
    4 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1 DNA 的提取
        4.2 構(gòu)建 DNA 混合池
        4.3 引物的設(shè)計(jì)和 PCR 擴(kuò)增
            4.3.1 MMP3 基因 SNP 檢測(cè)引物的設(shè)計(jì)與合成
            4.3.2 ADAM17 基因 SNP 檢測(cè)引物的設(shè)計(jì)與合成
            4.3.3 ARG2 基因 SNP 檢測(cè)引物的設(shè)計(jì)與合成
        4.4 PCR 擴(kuò)增體系（25μl）及程序
    5 DNA 測(cè)序分析
    6 高分辨率熔解曲線分型系統(tǒng)基因分型
        6.1 MMP3 基因 rs2977 和 rs4331 位點(diǎn) HRM 分型
            6.1.1 分型引物設(shè)計(jì)與合成
        6.2 ADAM17 基因 rs21928 和 rs38991 位點(diǎn) HRM 分型
            6.2.1 分型引物設(shè)計(jì)與合成
        6.3 ARG2 基因 rs30979 和 rs32860 位點(diǎn) HRM 分型
            6.3.1 分型引物設(shè)計(jì)與合成
    7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法
        7.1 遺傳多態(tài)性分析
第三部分 結(jié)果與分析
    1 牦牛血樣 DNA 提取質(zhì)量的檢測(cè)
    2 牦牛 MMP3 基因遺傳變異檢測(cè)
        2.1 PCR 產(chǎn)物電泳檢測(cè)
        2.2 牦牛 MMP3 序列比對(duì)分析
        2.3 牦牛 MMP3 基因 SNPs 基因型檢測(cè)
        2.4 SNPs 基因型頻率和等位基因頻率在 4 個(gè)牦牛群體中的分布
            2.4.1 位點(diǎn) rs2977（G→A）基因型頻率和等位基因頻率分布
            2.4.2 位點(diǎn) rs4331（C→G）基因型頻率和等位基因頻率分布
        2.5 各牦牛群體中 SNPs 位點(diǎn)的 Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)結(jié)果
        2.6 各群體間基因型頻率和等位基因頻率差異比較
        2.7 各牦牛群體連鎖不平衡分析
        2.8 各牦牛群體單倍型分析
    3 牦牛 ADAM17 基因遺傳變異檢測(cè)
        3.1 PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
        3.2 牦牛 ADAM17 序列比對(duì)分析
        3.3 牦牛 ADAM17 基因 SNPs 基因型檢測(cè)
        3.4 SNPs 基因型頻率和等位基因頻率在 4 個(gè)牦牛群體中的分布
        3.5 各牦牛群體中 SNPs 位點(diǎn)的 Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)結(jié)果
        3.6 各群體間基因型頻率和等位基因頻率差異比較
        3.7 各牦牛群體連鎖不平衡分析
        3.8 不同牦牛群體單倍型分析
    4 牦牛 ARG2 基因遺傳變異檢測(cè)
        4.1 PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
        4.2 牦牛 ARG2 序列比對(duì)分析
        4.3 牦牛 ARG2 基因 SNPs 基因型檢測(cè)
        4.4 SNPs 基因型頻率在 4 個(gè)牦牛群體中的分布
        4.5 各牦牛群體中 SNPs 位點(diǎn)的 Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)結(jié)果
        4.6 各群體間基因型頻率和等位基因頻率差異比較
        4.7 連鎖不平衡關(guān)系分析
        4.8 不同牦牛群體單倍型分析
第四部分 討論
    1 采樣和試驗(yàn)方法
        1.1 樣品采集
        1.2 DNA 混合池
    2 候選基因的 SNPs 與低氧適應(yīng)性
        2.1 MMP3 基因的 SNPs 與低氧適應(yīng)性的關(guān)系
        2.2 ADAM17 基因的 SNPs 與低氧適應(yīng)性的關(guān)系
        2.3 ARG2 基因的 SNPs 與低氧適應(yīng)性的關(guān)系
第五部分 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3821333