癢螨病主要是由癢螨寄生于哺乳動物的皮膚表面,以刺吸宿主的體液、淋巴液和滲出液為營養(yǎng),引起患病動物的一種慢性、頑固性、接觸性、傳染性皮膚病。癢螨病常見的臨床癥狀有劇癢、結(jié)痂、脫毛和皮膚肥厚,進(jìn)而影響進(jìn)食和休息,導(dǎo)致消瘦,嚴(yán)重時(shí)可引起繼發(fā)感染并死亡。目前,治療該病的方法主要是化學(xué)藥物療法。但是,藥物療法不僅費(fèi)用高昂,還會使寄生蟲產(chǎn)生耐藥性,防控效果不理想。不僅如此,畜產(chǎn)品中的藥物殘留對人體和自然環(huán)境的危害都不容小覷。因此,國內(nèi)外學(xué)者都在不停地尋找更安全高效的新興防控辦法,包括：植物提取物殺螨、生物殺螨和疫苗。而疫苗,是目前研發(fā)進(jìn)展最慢,技術(shù)難度最高,同時(shí)也是最充滿希望的新手段,更是近年來世界各地學(xué)者研究最熱的焦點(diǎn)之一。目前該病的診斷方法首先是根據(jù)臨床癥狀進(jìn)行判斷,如出現(xiàn)劇癢、皮膚增厚、有痂皮、脫毛和消瘦等特征,可做出初步診斷。確診還需進(jìn)一步病原學(xué)和免疫學(xué)診斷。在前人研究工作的基礎(chǔ)上,本論文進(jìn)行了兔癢螨肌動蛋白基因和兔癢螨肌鈣蛋白C基因的研究,取得的研究成果如下：一、兔癢螨肌動蛋白基因的克隆表達(dá)及免疫保護(hù)研究本研究中,我們克隆了兔癢螨肌動蛋白基因,并成功表達(dá)了重組蛋白(rPc-act)。序列...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 動物癢螨免疫學(xué)研究進(jìn)展
        1.1 抗原
        1.2 免疫應(yīng)答
            1.2.1 體液免疫
            1.2.2 細(xì)胞免疫
        1.3 宿主與癢螨在感染過程中的相互作用
        1.4 癢螨疫苗的研發(fā)進(jìn)展
    2. 本研究的目的和意義
第二章 兔癢螨肌動蛋白的克隆表達(dá),免疫定位及其免疫保護(hù)效力評估
    摘要
    引言
    1. 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 兔癢螨和實(shí)驗(yàn)兔
            1.1.2 載體、菌株和主要試劑
            1.1.3 主要儀器設(shè)備
            1.1.4 常用溶液的配制
            1.1.5 主要生物信息數(shù)據(jù)庫和分子生物學(xué)軟件
        1.2 試驗(yàn)方法
            1.2.1 兔癢螨肌動蛋白的克隆
                1.2.1.1 兔癢螨的采集
                1.2.1.2 兔癢螨總RNA的提取
                1.2.1.3 引物設(shè)計(jì)
                1.2.1.4 肌動蛋白基因的RT-PCR擴(kuò)增
                1.2.1.5 PCR產(chǎn)物的純化回收
                1.2.1.6 目的基因的連接轉(zhuǎn)化
                1.2.1.7 菌落PCR鑒定
                1.2.1.8 目的基因測序和分析
            1.2.2 兔癢螨肌動蛋白的表達(dá)載體構(gòu)建
                1.2.2.1 表達(dá)引物的設(shè)計(jì)
                1.2.2.2 表達(dá)基因的亞克隆
                1.2.2.3 重組T克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
                1.2.2.4 肌動蛋白質(zhì)粒提取與酶切
                1.2.2.5 pET32a(+)質(zhì)粒的提取與酶切
                1.2.2.6 酶切后的肌動蛋白質(zhì)粒與酶切后的pET32a(+)質(zhì)粒連接轉(zhuǎn)化
                1.2.2.7 重組表達(dá)質(zhì)粒酶切鑒定
            1.2.3 重組pET32a(+)-act的原核表達(dá)
                1.2.3.1 重組蛋白的表達(dá)
                1.2.3.2 SDS-PAGE分析
                1.2.3.3 表達(dá)條件優(yōu)化
                1.2.3.4 表達(dá)重組蛋白的可溶性分析
            1.2.4 重組蛋白純化
            1.2.5 重組蛋白的免疫印跡
                1.2.5.1 一抗血清的制備
                1.2.5.2 SDS-PAGE電泳
                1.2.5.3 電轉(zhuǎn)移
                1.2.5.4 免疫反應(yīng)
            1.2.6 高免血清的制備
            1.2.7 蛋白定位
            1.2.8 免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)
    2 結(jié)果
        2.1 兔癢螨肌動蛋白基因的克隆
            2.1.1 兔癢螨肌動蛋白基因的PCR擴(kuò)增
            2.1.2 序列比對分析
            2.1.3 兔癢螨肌動蛋白生物信息學(xué)分析
        2.2 癢螨肌動蛋白基因的原核表達(dá)
            2.2.1 表達(dá)條件優(yōu)化
            2.2.2 重組蛋白可溶性分析
        2.3 免疫印跡結(jié)果
        2.4 蛋白定位
        2.5 免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
        3.1 兔癢螨肌動蛋白基本特征分析
        3.2 特異性IgG水平分析
        3.3 總IgE水平分析
        3.4 癢螨免疫機(jī)制探討
第三章 兔癢螨肌鈣蛋白C的克隆表達(dá)和診斷價(jià)值評估
    摘要
    引言
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 兔癢螨和實(shí)驗(yàn)兔
            1.1.2 載體、菌株和主要試劑
            1.1.3 主要儀器設(shè)備
            1.1.4 常用溶液的配制
            1.1.5 主要生物信息數(shù)據(jù)庫和分子生物學(xué)軟件
        1.2 試驗(yàn)方法
            1.2.1 兔癢螨肌鈣蛋白C的克隆
                1.2.1.1 兔癢螨的采集
                1.2.1.2 兔癢螨總RNA的提取
                1.2.1.3 引物設(shè)計(jì)
                1.2.1.4 肌鈣蛋白C基因的RT-PCR擴(kuò)增
                1.2.1.5 PCR產(chǎn)物的純化回收
                1.2.1.6 目的基因的連接轉(zhuǎn)化
                1.2.1.7 菌落PCR鑒定
                1.2.1.8 目的基因測序和分析
            1.2.2 兔癢螨肌鈣蛋白C的表達(dá)載體構(gòu)建
                1.2.2.1 表達(dá)引物的設(shè)計(jì)
                1.2.2.2 表達(dá)基因的亞克隆
                1.2.2.3 重組T克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
                1.2.2.4 肌鈣蛋白C質(zhì)粒提取與酶切
                1.2.2.5 pET32a(+)質(zhì)粒的提取與酶切
                1.2.2.6 酶切后的肌鈣蛋白C質(zhì)粒與酶切后的pET32a(+)質(zhì)粒連接轉(zhuǎn)化
                1.2.2.7 重組表達(dá)質(zhì)粒酶切鑒定
            1.2.3 重組pET32a(+)-tro的原核表達(dá)
                1.2.3.1 重組蛋白的表達(dá)
                1.2.3.2 SDS-PAGE分析
                1.2.3.3 表達(dá)條件優(yōu)化
                1.2.3.4 表達(dá)重組蛋白的可溶性分析
            1.2.4 重組蛋白純化
            1.2.5 重組蛋白的免疫印跡
                1.2.5.1 一抗血清的制備
                1.2.5.2 SDS-PAGE電泳
                1.2.5.3 電轉(zhuǎn)移
                1.2.5.4 免疫反應(yīng)
            1.2.6 Dot-ELISA診斷
    2 結(jié)果
        2.1 兔癢螨肌鈣蛋白C基因的克隆
            2.1.1 兔癢螨肌鈣蛋白C基因的PCR擴(kuò)增
            2.1.2 兔癢螨肌鈣蛋白C生物信息學(xué)分析
        2.2 癢螨肌鈣蛋白基因的原核表達(dá)
            2.2.1 表達(dá)條件優(yōu)化
            2.2.2 重組蛋白可溶性分析
        2.3 免疫印跡結(jié)果
        2.4 Dot-ELISA診斷
    3 討論
        3.0 肌鈣蛋白C序列分析
        3.1 肌鈣蛋白C與已知變應(yīng)原交叉反應(yīng)性預(yù)測分析
        3.2 肌鈣蛋白C作為診斷抗原的潛力分析
        3.3 Dot-ELISA交叉反應(yīng)性分析
        3.4 評估方法可靠性分析
第四章 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
    1. 結(jié)論
    2. 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
研究生期間發(fā)表論文



本文編號：3821107