乳腺是奶山羊的泌乳器官,在分子水平研究乳腺的調(diào)控機理是國內(nèi)外的研究熱點。已有研究表明,miRNA對乳腺的發(fā)育和泌乳性能的調(diào)控具有重要作用。本實驗室在前期通過基因測序發(fā)現(xiàn),miR-3880在奶山羊乳腺發(fā)育和泌乳中差異表達,但目前尚未有關miR-3880調(diào)控奶山羊乳腺發(fā)育和泌乳的試驗研究。本研究以奶山羊乳腺上皮細胞為研究對象,利用生物信息學軟件預測、RT-qPCR、Western blot分析和雙熒光素酶報告載體構建等方法,研究miR-3880在奶山羊乳腺上皮細胞中對靶基因OGR1的調(diào)控作用;采用siRNA干擾技術研究靶基因OGR1對奶山羊乳腺上皮細胞的調(diào)控作用,以期闡明mi R-3880及其靶基因OGR1對奶山羊乳腺上皮細胞生長及泌乳的調(diào)控作用機制,為奶山羊泌乳調(diào)控提供試驗依據(jù)。主要研究結果如下:1.奶山羊乳腺上皮細胞中miR-3880對OGR1基因的調(diào)節(jié)作用利用靶基因預測軟件發(fā)現(xiàn),OGR1的3′UTR區(qū)含有miR-3880的靶向結合位點。構建OGR1-3′UTR的雙熒光素酶報告載體,分別將miRNA的模擬物(mimics)與報告載體共轉(zhuǎn)到293T細胞中,檢測熒光素酶的活性。結果表明,m...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 奶山羊乳腺調(diào)控機理的研究意義
    1.2 奶山羊乳腺發(fā)育的研究進展
        1.2.1 乳腺的發(fā)育及泌乳機理
        1.2.2 乳腺上皮細胞的簡介
    1.3 miRNA與乳腺發(fā)育
        1.3.1 miRNA的作用機制
        1.3.2 miRNA靶基因的鑒定方法
        1.3.3 miRNA對乳腺發(fā)育的調(diào)控
        1.3.4 miRNA對泌乳功能的調(diào)控作用
    1.4 RNA干擾技術的研究進展
    1.5 OGR1基因的研究進展
    1.6 本研究的目的和意義
    1.7 研究思路及技術路線
試驗研究
    第二章 miR-3880對OGR1基因調(diào)控作用的研究
        2.1 引言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 樣品采集
            2.2.2 主要儀器設備
            2.2.3 主要試驗試劑
            2.2.4 miR-3880靶基因的預測
            2.2.5 雙熒光素酶報告載體和突變載體的構建
            2.2.6 化學合成miRNA模擬物
            2.2.7 293 T細胞共轉(zhuǎn)染及熒光素酶活性檢測
            2.2.8 奶山羊乳腺上皮細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.9 Realtime-qPCR
            2.2.10 WesternBlot檢測
            2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2.3 結果分析
            2.3.1 miR-3880靶基因的生物信息預測
            2.3.2 OGR1-3′UTR區(qū)的克隆
            2.3.3 雙熒光素酶報告載體構建
            2.3.4 突變雙熒光素酶報告載體的構建
            2.3.5 熒光素酶活性的檢測分析
            2.3.6 miR-3880對OGR1基因在mRNA水平的影響
            2.3.7 miR-3880對OGR1基因在蛋白水平的影響
        2.4 討論
        2.5 小結
    第三章 OGR1對奶山羊乳腺上皮細胞調(diào)控作用的研究
        3.1 引言
        3.2 材料與方法
            3.2.1 樣品的采集
            3.2.2 主要儀器設備
            3.2.3 主要試驗試劑
            3.2.4 流式細胞術檢測細胞凋亡
            3.2.5 CCK8法檢測細胞增殖
            3.2.6 ELISA試劑盒檢測細胞中β-酪蛋白的合成
            3.2.7 甘油三酯酶法檢測試劑盒檢測細胞中甘油三酯的合成
            3.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        3.3 結果分析
            3.3.1 OGR1干擾效率檢測
            3.3.2 OGR1干擾后對乳腺上皮細胞生長發(fā)育的影響
            3.3.3 OGR1干擾后對乳腺上皮細胞泌乳功能的影響
        3.4 討論
            3.4.1 OGR1對奶山羊乳腺上皮細胞增殖和凋亡的影響
            3.4.2 OGR1對奶山羊乳腺上皮細胞泌乳成分的調(diào)節(jié)
        3.5 小結
研究結論
創(chuàng)新點
進一步研究的問題
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3819541