解旋酶BLM (bloom helicase)在細(xì)胞的增殖生長過程中有著重要的調(diào)控作用,YAP (yes associated protein)和TAZ (transcriptional coactivator with PDZ-binding motif)蛋白作為哺乳動物Hippo信號通路下游的轉(zhuǎn)錄共激活因子和關(guān)鍵成分,參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡以及遷移等多種生理過程,而長鏈非編碼RNA (long non-coding RNA, LncRNA)在細(xì)胞的生長增殖過程中具有重要的調(diào)控作用。為探究LncRNA對BLM、YAP、TAZ表達(dá)的影響,本研究通過mirBase (http://www.mirbase.org/)、NONCODE (http://www.noncode.org/)及自主開發(fā)程序SWChen 2.3篩選與BLM解旋酶相關(guān)的LncRNAs,利用熒光定量PCR技術(shù)檢測篩選的LncRNA在22RV-1、PC3、LNCap、WPMY-1四種細(xì)胞系中的表達(dá)情況,構(gòu)建LncRNA超表達(dá)載體,檢測轉(zhuǎn)染后24及48 h LncRNA對BLM、YAP及TAZ的影響。本研究以篩選出的NON...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與主要試劑
    1.2 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
    1.3 引物設(shè)計(jì)
    1.4 細(xì)胞總RNA的提取和cDNA的合成
    1.5 N183在WPMY-1、22RV-1、LNCap、PC3細(xì)胞中的表達(dá)譜分析
    1.6 N183超表達(dá)載體構(gòu)建及序列分析
    1.7 qRT-PCR檢測超表達(dá)pcDNA3.1(+)-N183對細(xì)胞BLM、YAP、TAZ轉(zhuǎn)錄水平的影響
    1.8 基因相對表達(dá)量的計(jì)算
2 結(jié)果與分析
    2.1 N183在各細(xì)胞系中的表達(dá)情況
    2.2 N183基因超表達(dá)載體的鑒定
    2.3 超表達(dá)N183對WPMY-1和PC3細(xì)胞中BLM、YAP、TAZ基因表達(dá)的影響
3 討論
4 結(jié)論



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