發(fā)布時(shí)間：2023-05-06 21:03

　　季節(jié)性氣候因素對養(yǎng)殖業(yè)的影響不容忽視,作為一個(gè)養(yǎng)殖業(yè)大國,我國每年由熱應(yīng)激造成的養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)損失十分驚人。因此,增加針對動(dòng)物的熱應(yīng)激損傷特征和規(guī)律研究對減少熱應(yīng)激損傷具有重要意義。熱應(yīng)激是一種全身性的反應(yīng),對動(dòng)物的行為、采食量、生產(chǎn)性能、血液循環(huán)、神經(jīng)內(nèi)分泌、免疫和生殖等方面均會(huì)產(chǎn)生不利影響。但熱應(yīng)激過程中可轉(zhuǎn)錄合成一組具有高度保守性的特殊蛋白-熱休克蛋白(heat shock proteins,Hsps)對維持細(xì)胞生存和內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定也起著十分重要的作用。熱休克蛋白60(Hsp60)作為熱休克蛋白家族重要的一員,已被證明與心血管疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病等的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本文的主要目的在于通過對大鼠和離體培養(yǎng)的鼠源H9C2心肌細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間的熱應(yīng)激處理,擬動(dòng)態(tài)觀察和了解熱應(yīng)激大鼠心肌細(xì)胞中Hsp60及其相應(yīng)mRNA的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平,以及Hsp60在體內(nèi)、外心肌細(xì)胞中的定位和分布等特點(diǎn),研究熱應(yīng)激過程中Hsp60的變化規(guī)律與大鼠心肌細(xì)胞熱應(yīng)激損傷的相關(guān)性,探討Hsp60的組織細(xì)胞保護(hù)機(jī)制。為研究熱應(yīng)激對體內(nèi)、外大鼠心肌細(xì)胞造成的應(yīng)激性損傷及其程度,本試驗(yàn)通過病理學(xué)檢測,觀察了受試大鼠心肌...

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
部分縮寫的中英文對照
引言
上篇 文獻(xiàn)綜述
    一、熱應(yīng)激概述
        1 熱應(yīng)激的概念
            1.1 應(yīng)激的概念
            1.2 應(yīng)激的分類
            1.3 應(yīng)激的調(diào)節(jié)
        2 熱應(yīng)激對機(jī)體的影響
            2.1 熱應(yīng)激對動(dòng)物行為的影響
            2.2 熱應(yīng)激對動(dòng)物采食量的影響
            2.3 熱應(yīng)激對動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響
            2.4 熱應(yīng)激對動(dòng)物血液生化指標(biāo)的影響
            2.5 熱應(yīng)激對動(dòng)物內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響
            2.6 熱應(yīng)激對動(dòng)物免疫功能的影響
            2.7 熱應(yīng)激對動(dòng)物生殖系統(tǒng)的影響
    二、熱休克蛋白(Heat shock proteins,HSPs)
        1 HSPs的概念
        2 HSPs的分類和特點(diǎn)
        3 HSPs與熱應(yīng)激損傷
        4 Hsp60/Hsp10的結(jié)構(gòu)與功能
        5 Hsp60/Hsp10的分布與功能
        6 Hsp60/Hsp10與疾病
            6.1 Hsp60/Hsp10與心血管疾病的關(guān)系
            6.2 Hsp60/Hsp10與癌癥的關(guān)系
        7 Hsp60/Hsp10與免疫的關(guān)系
        8 Hsp60/Hsp10基因表達(dá)的調(diào)控
        9 Hsp60/Hsp10的研究展望
    參考文獻(xiàn)
下篇 試驗(yàn)研究
    第一章 體內(nèi)、外大鼠心肌細(xì)胞熱應(yīng)激模型建立及熱應(yīng)激性損傷特點(diǎn)
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞
                1.1.2 器材與設(shè)備
                1.1.3 主要試劑
                1.1.4 主要溶液配制
            1.2 方法
                1.2.1 在體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及取樣
                1.2.2 離體實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組及取樣
                1.2.3 HE染色
                1.2.4 MTT試驗(yàn)
        2 結(jié)果
            2.1 受試大鼠的臨床癥狀
            2.2 熱應(yīng)激對H9C2離體大鼠心肌細(xì)胞活力及存活率的影響
            2.3 在體和離體大鼠心肌細(xì)胞在熱應(yīng)激狀態(tài)下的組織病理學(xué)變化
            2.4 熱應(yīng)激導(dǎo)致的死亡大鼠心肌細(xì)胞的病理學(xué)變化
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第二章 熱應(yīng)激狀態(tài)下Hsp60在大鼠離體和在體心肌細(xì)胞中的表達(dá)與定位
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞
                1.1.2 器材與設(shè)備
                1.1.3 主要試劑
                1.1.4 主要溶液配制
                1.1.5 分析工具軟件
            1.2 方法
                1.2.1 在體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及取樣
                1.2.2 離體實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組及取樣
                1.2.3 Westem blot檢測
                1.2.4 熒光定量PCR檢測
                1.2.5 免疫組織化學(xué)方法檢測Hsp60蛋白在熱應(yīng)激大鼠心肌細(xì)胞中的表達(dá)
                1.2.6 間接免疫熒光檢測Hsp60蛋白在熱應(yīng)激H9C2大鼠心肌細(xì)胞中的表達(dá)
        2 結(jié)果
            2.1 熱應(yīng)激大鼠體內(nèi)、外心肌細(xì)胞Hsp60表達(dá)水平的變化
            2.2 熱應(yīng)激大鼠體內(nèi)、外心肌細(xì)胞hsp60 mRNA表達(dá)水平的變化
            2.3 熱應(yīng)激大鼠體內(nèi)、外心肌細(xì)胞內(nèi)Hsp60的定位
            2.4 熱應(yīng)激導(dǎo)致的死亡大鼠心肌細(xì)胞中Hsp60的表達(dá)
            2.5 熱應(yīng)激4h后H9C2大鼠心肌細(xì)胞中Hsp60的定位
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第三章 熱應(yīng)激狀態(tài)下Hsp60相關(guān)蛋白Hsp10在大鼠心肌細(xì)胞中的表達(dá)與定位
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞
                1.1.2 器材與設(shè)備
                1.1.3 主要試劑
            1.2 方法
                1.2.1 在體實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)分組及取樣
                1.2.2 離體實(shí)驗(yàn)分組及取樣
                1.2.3 Western blot檢測
                1.2.4 熒光定量PCR檢測
                1.2.5 間接免疫熒光測Hsp10蛋白在熱應(yīng)激H9C2大鼠心肌細(xì)胞中的表達(dá)
                1.2.6 軟件統(tǒng)計(jì)分析
        2 結(jié)果
            2.1 熱應(yīng)激大鼠心肌細(xì)胞Hsp10蛋白表達(dá)水平的變化
            2.2 熱應(yīng)激大鼠心肌細(xì)胞hsp10 mRNA表達(dá)水平的變化
            2.3 熱應(yīng)激處理的H9C2大鼠心肌細(xì)胞系Hsp10蛋白的定位結(jié)果
            2.4 大鼠組織細(xì)胞中Hsp60和Hsp10的相關(guān)性分析
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第四章 細(xì)胞外的Hsp60對熱應(yīng)激處理H9C2心肌細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)及其機(jī)理的初步研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 試驗(yàn)用細(xì)胞
                1.1.2 器材與設(shè)備
                1.1.3 主要試劑
                1.1.4 主要溶液的配制
            1.2 方法
                1.2.1 H9C2大鼠心肌細(xì)胞上清液中Hsp60的檢測
                1.2.2 MAPK通路相關(guān)蛋白ERK、JNK抑制劑濃度的選擇
                1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測心肌細(xì)胞的損傷
                1.2.4 Western Blotting
                1.2.5 熒光定量
        2 結(jié)果
            2.1 H9C2大鼠心肌細(xì)胞上清液中Hsp60的檢測
            2.2 抑制劑PD98059和SP600125濃度的篩選
            2.3 熱應(yīng)激對H9C2心肌細(xì)胞凋亡和壞死的影響
            2.4 抑制細(xì)胞膜外的Hsp60對熱應(yīng)激H9C2心肌細(xì)胞損傷及相關(guān)基因的影響
                2.4.1 抑制細(xì)胞膜外的Hsp60對熱應(yīng)激H9C2細(xì)胞損傷的影響
                2.4.2 抑制細(xì)胞膜外的Hsp60對熱應(yīng)激H9C2心肌細(xì)胞損傷相關(guān)基因的影響
            2.5 抑制ERK和JNK的活化對熱應(yīng)激H9C2細(xì)胞損傷的影響
            2.6 熱應(yīng)激對H9C2心肌細(xì)胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影響
                2.6.1 熱應(yīng)激對H9C2心肌細(xì)胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影響
                2.6.2 熱應(yīng)激對抑制了細(xì)胞外的Hsp60后的H9C2心肌細(xì)胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影響
            2.7 抑制細(xì)胞外的Hsp60對熱應(yīng)激H9C2細(xì)胞ERK和JNK蛋白磷酸化的影響
            2.8 抑制細(xì)胞外的Hsp60及MAPK相關(guān)蛋白對熱應(yīng)激H9C2細(xì)胞內(nèi)Hsp60及其相關(guān)蛋白Hsp10的影響
                2.8.1 MAPK抑制劑對熱應(yīng)激H9C2細(xì)胞內(nèi)Hsp60和Hsp10的影響
                2.8.2 抑制細(xì)胞膜外的Hsp60對熱應(yīng)激H9C2細(xì)胞內(nèi)Hsp60和Hsp10的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
本文創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3809609