為研究小尾寒羊綿羊白細胞抗原Ⅰ(Ovis aries leukocyte antigen classⅠ,OLAⅠ)輕鏈四聚體前體鏈β₂微球蛋白(β₂-microglobulin,β₂m)的結(jié)構(gòu)和功能,根據(jù)GenBank中公布的綿羊β₂m基因設(shè)計特異性引物,提取小尾寒羊全血中的RNA并運用RT-PCR方法擴增綿羊β₂m基因,將擴增的綿羊β₂m基因克隆到pMD18-T載體,篩選出陽性克隆菌pMD18T-OLAⅠ-β₂m,經(jīng)雙酶切后與表達載體pET-28a(+)連接,再轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞中構(gòu)建pET-28a(+)-OLAⅠ-β₂m重組表達菌,經(jīng)IPTG誘導表達,SDS-PAGE檢測目的蛋白大小及表達情況;運用SOMPA在線軟件預測OLAⅠ-β₂m蛋白的二級結(jié)構(gòu)。PCR擴增結(jié)果顯示,目的基因大小為357 bp,與理論值相符,擴增片段成功克隆到pMD18-T載體,經(jīng)EcoRⅠ和H...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計及合成
        1.2.2 OLAⅠ-β2m基因序列的亞克隆
        1.2.3 pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m在大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞中的誘導表達
        1.2.4 pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m蛋白的提取及純化
        1.2.5 SDS-PAGE檢測蛋白表達
        1.2.6 Western blotting檢測蛋白表達
        1.2.7 OLAⅠ-β2m序列及OLAⅠ-β2m蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)分析
2 結(jié) 果
    2.1 OLAⅠ-β2m基因胞外區(qū)PCR擴增
    2.2 pMD18T-OLAⅠ-β2m重組質(zhì)粒的鑒定
    2.3 pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m重組質(zhì)粒的鑒定
    2.4 重組OLAⅠ-β2m在大腸桿菌中的誘導表達及SDS-PAGE鑒定
    2.5 OLAⅠ-β2m的Western blotting結(jié)果
    2.6 OLAⅠ-β2m序列分析及OLAⅠ-β2m蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)分析
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號：3809559