鴿新城疫(Newcastle disease,ND)又被稱為鴿瘟,是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)變異株鶴 Ⅰ 型副粘病毒(Pigeon Paramyxovirus type 1,PPMV-1)引起的一種急性傳染病,該病是危害養(yǎng)鴿業(yè)的主要疾病之一,給養(yǎng)鴿業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。目前我國鴿群中暴發(fā)新城疫呈上升的趨勢,而對鴿源NDV所引起的固有免疫相關(guān)因子的研究相對較少,因此非常有必要從固有免疫水平上研究對鴿有宿主特異性的基因Ⅵb亞型和國內(nèi)主要流行基因Ⅶd亞型鴿源NDV對宿主固有免疫相關(guān)因子的表達(dá),為進(jìn)一步了解鴿源NDV的致病性提供宿主方面的信息,對防控鴿NDV感染具有重要意義。本研究分別設(shè)計(jì)合成了雞的誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(iNOS)、IFNβ、IFNγ和鴿的IFNγ、iNOS、MDA5、IL-2等固有免疫相關(guān)因子的特異性引物,通過克隆純化構(gòu)建質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,構(gòu)建雞的iNOS、IFNβ、IFNγ和鴿的 IFNγ、iNOS、MDA5、IL-2 熒光定量 RT-PCR(qRT-PCR)標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示,所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線擴(kuò)增效率均介于92%～102%之間,線性相...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要英文縮寫詞
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 禽Ⅰ型副粘病毒簡述
        1.1.1 NDV的致病性
        1.1.2 NDV的理化性質(zhì)
        1.1.3 NDV的血凝活性
        1.1.4 NDV的培養(yǎng)特性
    1.2 機(jī)體的免疫系統(tǒng)概述
    1.3 鴿的固有免疫概述
        1.3.1 鴿的固有免疫細(xì)胞
        1.3.2 鴿的細(xì)胞因子簡介
    1.4 模式識別受體(PRRs)
        1.4.1 模式識別受體與病原相關(guān)分子模式簡介
        1.4.2 Toll樣受體簡介
    1.5 本課題研究的目的和意義
第二章 禽固有免疫相關(guān)因子qRT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.1 材料
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 主要試劑及儀器
        2.1.3 主要試劑
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 引物的設(shè)計(jì)及合成
        2.2.2 細(xì)胞總RNA的提取及其cDNA的合成
        2.2.3 目的基因的RT-PCR擴(kuò)增
        2.2.4 陽性克隆株的鑒定及序列測定
        2.2.5 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.2.6 qRT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.2.7 敏感性及重復(fù)性試驗(yàn)
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 細(xì)胞因子RT-PCR結(jié)果
        2.3.2 質(zhì)粒濃度及拷貝數(shù)結(jié)果
        2.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.3.4 溶解曲線分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 兩種基因亞型鴿源NDV體外感染CEF和PEF引起固有免疫應(yīng)答差異的研究
    3.1 材料
        3.1.1 病毒及試驗(yàn)材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 病毒的復(fù)繁
        3.2.2 原代雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)的制備
        3.2.3 原代鴿胚成纖維細(xì)胞(PEF)的制備
        3.2.4 不同基因亞型鴿源NDV的TCID₅₀測定
        3.2.5 細(xì)胞的培養(yǎng)與收集
        3.2.6 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測病毒載量
        3.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測檢測固有免疫相關(guān)基因表達(dá)的研究
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 兩株NDV的生物學(xué)特性
        3.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測檢測病毒載量結(jié)果
        3.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測檢測固有免疫相關(guān)基因表達(dá)的研究
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 不同基因亞型鴿源NDV人工感染對鴿固有免疫相關(guān)因子基因表達(dá)的研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 病毒
        4.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要試驗(yàn)儀器
    4.2 方法
        4.2.1 動(dòng)物試驗(yàn)
        4.2.2 樣品的采集及處理
        4.2.3 樣品總RNA的提取
            4.2.3.1 樣品總RNA的反轉(zhuǎn)錄
        4.2.4 兩種館源NDV的病毒ELD₅₀的測定方法
        4.2.5 不同基因亞型鴿源NDV人工感染非免疫鴿后血清抗體水平的變化及脾臟病毒載量變化的檢測
        4.2.6 不同基因亞型鴿源NDV體內(nèi)感染對固有免疫相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測
        4.2.7 數(shù)據(jù)處理及分析
    4.3 試驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 臨床癥狀及剖檢病變
        4.3.2 ELD₅₀測定結(jié)果
        4.3.3 不同基因亞型鴿源NDV人工感染鴿后血清H1抗體水平
        4.3.4 不同基因亞型鴿源NDV人工感染非免疫鴿組織病理變化結(jié)果
        4.3.5 不同基因亞型鴿源NDV人工感染非免疫鴿后脾臟和胰腺的病毒載量結(jié)果
        4.3.6 不同基因亞型鴿源NDV人工感染固有免疫相關(guān)通路關(guān)鍵分子mRNA轉(zhuǎn)錄水平
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3808986