脂多糖(LPS)是引起炎癥的刺激源之一,常用于建立炎癥模型。前期研究發(fā)現(xiàn)5μg/mL的LPS刺激6 h能引起小鼠乳腺上皮細(xì)胞(MECs)生長活性及炎性因子分泌發(fā)生變化,LPS早期刺激炎癥信號(hào)通路尚不清楚。為了探明LPS早期刺激MECs免疫炎性關(guān)鍵基因及金英黃歸湯(簡稱金英湯,JYT)對(duì)其影響,本研究采用ELISA檢測(cè)5μg/mL的LPS刺激細(xì)胞6 h細(xì)胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌量驗(yàn)證細(xì)胞早期炎癥反應(yīng),運(yùn)用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)(RNA-seq)檢測(cè)LPS刺激細(xì)胞后的差異基因,進(jìn)行GO和KEGG Pathway分析篩選與炎癥免疫相關(guān)基因,并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)驗(yàn)證部分差異基因相關(guān)性,通過siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默差異基因中Cxcl1、Ccl2研究其在LPS信號(hào)通路中關(guān)鍵靶向,并運(yùn)用qPCR檢測(cè)金英湯對(duì)Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Birc3、Icam1和Cav1 mRNA的影響。結(jié)果顯示:(1)5μg/mL的LPS刺激小鼠MECs 6 h,細(xì)胞分泌的炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6都顯著或極顯著的升高(P<0.05,P<0...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
1 材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 主要藥物及試劑
    1.3 主要溶液配制
    1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
2 方法
    2.1 ELISA法檢測(cè)LPS致小鼠MECs分泌的炎性因子
    2.2 RNA-seq篩選LPS作用小鼠MECs前后差異表達(dá)基因
        2.2.1 細(xì)胞總RNA提取及質(zhì)檢
        2.2.2 RNA-seq檢測(cè)
        2.2.3 上調(diào)差異基因數(shù)據(jù)分析
    2.3 GO和Pathway分析篩選與炎癥免疫相關(guān)的基因
    2.4 部分差異表達(dá)基因的qPCR驗(yàn)證
    2.5 Cxcl1和Ccl2在小鼠MECsLPS炎癥免疫信號(hào)通路中作用地位的分析
        2.5.1 轉(zhuǎn)染片段設(shè)計(jì)及最佳轉(zhuǎn)染條件篩選
        2.5.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Cxcl1、Ccl2沉默后對(duì)LPS信號(hào)通路中NF-κBp65的影響
        2.5.3 ELISA法檢測(cè)Cxcl1、Ccl2沉默后對(duì)LPS致細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的影響
    2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)金英湯對(duì)Cxcl1、Csf2、Csf3、Ccl2、Met、Birc3、Icam1、Cav1mRNA的影響
    2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
3 結(jié)果
    3.1 LPS對(duì)MECs分泌炎性因子TNF-α、IL-1β及IL-6的影響
    3.2 LPS刺激后小鼠MECs差異表達(dá)基因
        3.2.1 RNA提取及質(zhì)檢結(jié)果
        3.2.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析結(jié)果
    3.3 小鼠MECs與炎癥免疫相關(guān)的差異表達(dá)基因
        3.3.1 基因功能及GO分析
        3.3.2 LPS信號(hào)通路相關(guān)Pathway分析
        3.3.3 部分差異表達(dá)基因的RT-qPCR驗(yàn)證
    3.4 Cxcl1、Ccl2在LPS炎癥信號(hào)通路中的作用地位
        3.4.1 Cxcl1、Ccl2的siRNA最佳轉(zhuǎn)染條件
        3.4.2 Cxcl1、Ccl2基因沉默后對(duì)LPS信號(hào)通路中NF-κBp65的影響
        3.4.3 Cxcl1、Ccl2基因沉默后對(duì)LPS致細(xì)胞分泌炎性因子TNF-α、IL-及IL-1β量的影響
    3.5 金英湯對(duì)MECs中8個(gè)差異基因的影響
4 討論
    4.1 LPS刺激小鼠MECs建立炎癥模型
    4.2 LPS刺激后小鼠MECs中差異表達(dá)基因
    4.3 小鼠MECs中與LPS信號(hào)通路相關(guān)的上調(diào)差異基因
    4.4 Cxcl1、Ccl2與LPS信號(hào)通路的關(guān)系
    4.5 金英湯對(duì)LPS信號(hào)通路相關(guān)因子的影響
5 結(jié)論
文獻(xiàn)綜述
    1 炎癥與LPS及其信號(hào)通路
        1.1 炎癥的概述
        1.2 LPS概述
        1.3 LPS信號(hào)通路
    2 RNA-seq研究進(jìn)展
        2.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序基礎(chǔ)分析示意圖
        2.2 測(cè)序基礎(chǔ)分析方法
        2.3 RNA-seq在轉(zhuǎn)錄組學(xué)中的優(yōu)勢(shì)
        2.4 轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的應(yīng)用
            2.4.1 基因功能注釋及獲取新轉(zhuǎn)錄本
            2.4.2 進(jìn)行基因轉(zhuǎn)錄水平研究
            2.4.3 非轉(zhuǎn)錄RNA功能研究
            2.4.4 轉(zhuǎn)錄本結(jié)構(gòu)變異研究
            2.4.5 分子標(biāo)記的開發(fā)
            2.4.6 新基因的挖掘及其功能預(yù)測(cè)
        2.5 RNA-seq的研究展望
    3 Cxcl1和Ccl2的生物學(xué)特性及功能
        3.1 Cxcl1的生物學(xué)特性及功能
        3.2 Ccl2的生物學(xué)特性及功能
    4 siRNA研究進(jìn)展
        4.1 siRNA的作用機(jī)制
        4.2 siRNA技術(shù)的特征
        4.3 siRNA的應(yīng)用
    5 中藥的抗炎免疫及其機(jī)制研究
參考文獻(xiàn)
附錄一 在讀碩士期間發(fā)表論文情況
附錄二 在讀期間參與的科研項(xiàng)目
致謝



本文編號(hào)：3807914