皮質(zhì)醇作為一種內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素,在機體的正常生理功能中起著重要的調(diào)控作用。在奶牛圍產(chǎn)期,由于受到多種應激刺激,如妊娠應激、分娩應激、泌乳應激和代謝應激等,皮質(zhì)醇濃度會出現(xiàn)較大范圍的波動性升高。而且在這個階段,奶牛易患多種生殖道疾病。奶牛產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎是導致奶牛生殖障礙的主要原因,也給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。奶牛分娩后,子宮頸處于開放狀態(tài),幾乎所有奶牛生殖道都會被細菌污染,大腸桿菌是造成奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要致病菌。目前臨床預防及治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的方法很多,但是沒有標準的治療方案并且預后不是很理想,導致很大的淘汰率。糖皮質(zhì)激素在臨床上一直應用于控制炎性疾病,對抑制各種病原引起的炎癥反應有效,但是內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素對子宮內(nèi)膜炎的調(diào)控作用鮮有報道。本研究以原代奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞(BEECs)和小鼠單核巨噬細胞(RAW264.7)為研究對象,利用LPS處理細胞制作炎癥模型,并利用不同濃度的皮質(zhì)醇處理,然后通過CCK-8法、實時熒光定量PCR、蛋白免疫印跡和免疫熒光等方法,探索皮質(zhì)醇對LPS誘導的BEECs和RAW264.7細胞相關細胞因子及信號通路的影響,以闡明皮質(zhì)醇對LPS誘導的該細胞...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第一部分 前言
    第一章 奶牛子宮內(nèi)膜炎的危害與研究進展
        1 產(chǎn)后常見的子宮疾病
            1.1 子宮炎
            1.2 臨床型子宮內(nèi)膜炎
            1.3 亞臨床型子宮內(nèi)膜炎
            1.4 子宮蓄膿
        2 子宮疾病對生產(chǎn)能力的影響
        3 產(chǎn)后子宮疾病的發(fā)病機制
            3.1 細菌感染
            3.2 病毒感染
            3.3 子宮疾病與先天免疫
        4 子宮疾病的診斷
        5 子宮內(nèi)膜炎的治療
            5.1 抗生素的療效
            5.2 PGF_2α的療效
        6 子宮疾病的預防
        7 激素與免疫
    第二章 皮質(zhì)醇與細胞炎性相關信號通路的關系
        1 巨噬細胞和上皮細胞與先天免疫或炎癥的關系
        2 皮質(zhì)醇與先天免疫或炎癥的關系
        3 LPS對細胞的作用
        4 NF-κB信號通路
        5 MAPK信號通路
    第三章 皮質(zhì)醇與增殖相關通路的關系
        1 皮質(zhì)醇與細胞增殖的關系
        2 與組織修復相關的生長因子
        3 Wnt/β-catenin信號通路
        4 PI3K/AKT信號通路
    參考文獻
第二部分 試驗研究
    第一章 LPS對BEECs和RAW264.7細胞NF-KB和MAPK信號通路的影響
        1 材料
            1.1 實驗動物和細胞
            1.2 主要儀器
            1.3 主要化學試劑
        2 方法
            2.1 原代奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞的培養(yǎng)
            2.2 細胞傳代
            2.3 免疫組化鑒定奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞
            2.4 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞的生長曲線測定
            2.5 Western Blot檢測NF-κB和MAPK通路關鍵蛋白的表達水平
            2.6 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞的培養(yǎng)結(jié)果
            3.2 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞的角蛋白-18免疫組化鑒定結(jié)果
            3.3 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞的生長曲線
            3.4 LPS對BEECs和RAW264.7細胞NF-κB信號通路的影響
            3.5 LPS對BEECs和RAW264.7細胞MAPK信號通路的影響
        4 討論
        參考文獻
    第二章 皮質(zhì)醇對LPS誘導的BEECs和RAW264.7細胞INOS和COX-2表達的影響
        1 材料
            1.1 實驗動物和細胞
            1.2 實驗儀器
            1.3 主要化學試劑
        2 方法
            2.1 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞的培養(yǎng)
            2.2 細胞傳代
            2.3 CCK-8檢測BEECs和RAW264.7細胞的活性
            2.4 ELISA法檢測培養(yǎng)液中炎性介質(zhì)PGE2的濃度
            2.5 qRT-PCR檢測細胞iNOS和COX-2的基因表達水平
            2.6 Western Blot檢測細胞iNOS和COX-2蛋白的表達變化
            2.7 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 BEECs和RAW264.7細胞的活性變化
            3.2 RAW264.7細胞培養(yǎng)液中PGE2的含量變化
            3.3 BEECs和RAW264.7細胞iNOS與COX-2的基因表達變化
            3.4 RAW264.7細胞iNOS和COX-2的蛋白表達變化
        4 討論
        參考文獻
    第三章 皮質(zhì)醇對LPS誘導的BEECs和RAW264.7細胞NF-KB和MAPK信號通路的影響
        1 材料
            1.1 實驗動物和細胞
            1.2 實驗儀器
            1.3 主要化學試劑
        2 方法
            2.1 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞培養(yǎng)
            2.2 細胞傳代
            2.3 ELISA檢測相關炎性因子的含量
            2.4 qRT-PCR檢測細胞的炎性因子基因表達變化
            2.5 Western Blot檢測NF-κB和MAPK通路關鍵蛋白的表達水平
            2.6 免疫熒光法檢測奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞p65的表達
            2.7 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 RAW264.7細胞培養(yǎng)液中相關炎性因子的含量變化
            3.2 BEECs和RAW264.7細胞相關炎性因子基因的表達情況
            3.3 BEECs和RAW264.7細胞的NF-κB通路變化
            3.4 BEECs的NF-κB p65蛋白核轉(zhuǎn)位情況
            3.5 BEECs和RAW264.7細胞的MAPK通路變化
        4 討論
        參考文獻
    第四章 皮質(zhì)醇對LPS誘導的BEECs損傷修復機制的研究
        1 材料
            1.1 實驗動物和細胞
            1.2 實驗儀器
            1.3 主要化學試劑
        2 方法
            2.1 奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞培養(yǎng)
            2.2 細胞傳代
            2.3 qRT-PCR檢測細胞的相關生長因子基因表達變化
            2.4 Western Blot檢測Wnt/β-catenin和PI3K/AKT通路關鍵蛋白的表達
            2.5 免疫熒光法檢測BEECs中β-catenin的表達
            2.6 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 BEECs的相關生長因子基因的表達情況
            3.2 BEECs的Wnt/β-catenin通路變化
            3.3 BEECs的β-catenin蛋白核轉(zhuǎn)位情況
            3.4 BEECs的PI3K/AKT通路變化
        4 討論
    參考文獻
結(jié)論
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝



本文編號：3806377