PD-1與其配體PD-Ls屬于B7-CD28超家族，最早在T細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)研究中發(fā)現(xiàn)。PD-1與PD-Ls結(jié)合后介導(dǎo)的抑制信號(hào)對(duì)T細(xì)胞的活化和耐受有重要的調(diào)節(jié)作用。阻斷PD-1與其配體（PD-Ls）的結(jié)合可以使病毒持續(xù)性感染時(shí)功能障礙或衰竭的CD8+T細(xì)胞功能恢復(fù)。PD-1:PD-Ls通路能夠在中樞免疫和外周免疫反應(yīng)中傳遞免疫耐受和免疫抑制信號(hào)，控制著細(xì)胞因子和抗體的產(chǎn)生、CTL的增殖活化及對(duì)自身抗原的耐受。在動(dòng)物免疫抑制性疾病或病毒持續(xù)性感染方面，T細(xì)胞免疫抑制性受體PD-1的研究才剛剛起步，特別是在家禽類該方面的研究還少見(jiàn)報(bào)道。 本課題以IBDV感染后T淋巴細(xì)胞表面免疫抑制性受體PD-1及其配體PD-Ls為對(duì)象，研究其表達(dá)變化情況及其與機(jī)體免疫狀態(tài)的關(guān)系。根據(jù)GenBank中雞PD-1、PD-L1、PD-L2、IL-2、IL-6、IFN-γ以及參考基因β-actin的序列信息，分別設(shè)計(jì)特異引物擴(kuò)增目的基因片段，得到各自陽(yáng)性克隆質(zhì)粒，以陽(yáng)性質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行敏感性、特異性和重復(fù)性試驗(yàn)，建立上述基因的SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法。并利...

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 前言
    2 IBDV 致病機(jī)理
        2.1 IBDV 對(duì)體液免疫的影響
        2.2 IBDV 對(duì)細(xì)胞免疫的影響
        2.3 IBDV 對(duì)先天免疫的影響
    3 PD-1 及配體概述
        3.1 PD-1 及其配體的結(jié)構(gòu)
        3.2 PD-1 及配體的表達(dá)
        3.3 PD-1:PD-Ls 通路在中樞免疫和外周免疫反應(yīng)中傳遞免疫耐受和免疫抑制信號(hào)
    4 展望
引言
第二章 雞 PD-1、PD-L1、PD-L2 及細(xì)胞因子 IL-2、IL-6、IFN-γ實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 檢測(cè)方法的建立
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和菌種
        1.2 主要試劑
        1.3 主要試劑的配制
        1.4 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.2 總 RNA 的提取與反轉(zhuǎn)錄
        2.3 待測(cè)基因及參考基因β-actin 的 PCR 擴(kuò)增
        2.4 待測(cè)基因及參考基因β-actin 的 PCR 產(chǎn)物的回收
        2.5 待測(cè)基因及參考基因β-actin 與 pMD18-T-simple 克隆載體連接
        2.6 待測(cè)基因及參考基因β-actin 重組克隆質(zhì)粒濃度的測(cè)定
        2.7 待測(cè)基因及參考基因β-actin 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.8 敏感性、特異性和重復(fù)性試驗(yàn)
        2.9 臨床樣品的應(yīng)用研究
    3 結(jié)果與分析
        3.1 待測(cè)基因及參考基因β-actin PCR 結(jié)果
        3.2 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        3.4 特異性、敏感性及重復(fù)性分析
        3.5 臨床樣品的應(yīng)用研究
    4 討論
        4.1 參考基因的選擇
        4.2 SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的優(yōu)勢(shì)
        4.3 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        4.4 SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 檢測(cè)方法的建立
    5 小結(jié)
第三章 IBDV 感染后 PD-1 及其配體 PD-L1、PD-L2 及細(xì)胞因子的表達(dá)情況初步研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和菌種
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 主要試劑的配制
        1.4 主要儀器設(shè)備
        1.5 引物的設(shè)計(jì)與合成
        1.6 感染后法氏囊內(nèi) IBDV 載量檢測(cè)
        1.7 IBDV 感染后雞 PD-1、PD-L1、PD-L2 和細(xì)胞因子 IL-2、IL-6 及 IFN-γ表達(dá)水平檢測(cè)
        1.8 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 IBDV 感染后法氏囊內(nèi) IBDV 載量檢測(cè)
        2.2 IBDV 感染后雞 PD-1、PD-L1、PD-L2 表達(dá)變化
        2.3 IBDV 感染后細(xì)胞因子 IL-2、IL-6 及 IFN-γ表達(dá)變化
    3 討論
        3.1 PD-1、PD-Ls 的表達(dá)變化與免疫抑制的關(guān)系
    4 小結(jié)
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3798963