發(fā)布時(shí)間：2023-04-23 00:59

　　Ghrelin是從大鼠胃中分離純化得到的含有28氨基酸殘基的活性肽，參與攝食、生長(zhǎng)激素(growth hormone，GH)分泌、能量平衡、免疫、生殖和泌乳等多種生理功能的調(diào)節(jié)，有關(guān)Ghrelin對(duì)泌乳調(diào)控的研究資料較少，且大部分都是從鼠上獲得的。本文以奶山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，通過(guò)檢測(cè)Ghrelin和GHSR-1a在奶山羊體內(nèi)的表達(dá)分布和各泌乳相關(guān)激素在泌乳周期變化規(guī)律，確定Ghrelin對(duì)奶山羊泌乳的調(diào)節(jié)作用，檢測(cè)Ghrelin對(duì)離體乳腺組織和乳腺上皮細(xì)胞功能影響，進(jìn)一步確定Ghrelin對(duì)乳腺泌乳活動(dòng)的調(diào)節(jié)作用。研究取得如下結(jié)果。 1. Ghrelin及其受體GHSR-1a mRNA在成年奶山羊消化道、下丘腦、垂體、卵巢和乳腺組織中均有表達(dá)，在消化道，皺胃Ghrelin mRNA和蛋白表達(dá)量最高，Ghrelin和GHSR-1a陽(yáng)性細(xì)胞在整個(gè)消化道都有分布，在皺胃，Ghrelin陽(yáng)性細(xì)胞大體可分為開放和閉鎖兩種類型，在腸道，Ghrelin陽(yáng)性細(xì)胞大部分分布于腸腺上皮之間，而在食道、瘤胃和網(wǎng)胃中，Ghrelin陽(yáng)性細(xì)胞多為復(fù)層鱗狀上皮的基底細(xì)胞。GHSR-1a陽(yáng)性細(xì)胞多分布于消化道的神經(jīng)節(jié)細(xì)...

【文章頁(yè)數(shù)】：124 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)綜述
    第一章 Ghrelin 研究進(jìn)展
        1.1 Ghrelin 的發(fā)現(xiàn)
        1.2 Ghrelin 基因、蛋白結(jié)構(gòu)及其合成
        1.3 Ghrelin 的活化
        1.4 Ghrelin 組織分布
        1.5 Ghrelin 生物學(xué)功能
            1.5.1 Ghrelin 促進(jìn)攝食、調(diào)節(jié)體重、參與能量平衡的調(diào)節(jié)
            1.5.2 Ghrelin 促進(jìn) GH 釋放
            1.5.3 Ghrelin 對(duì)生殖的調(diào)節(jié)作用
            1.5.4 Ghrelin 對(duì)免疫系統(tǒng)影響
            1.5.5 Ghrelin 對(duì)細(xì)胞增殖的影響
            1.5.6 Ghrelin 對(duì)心血管功能的影響
            1.5.7 Ghrelin 對(duì)記憶的影響
            1.5.8 Ghrelin 其他作用
        1.6 Ghrelin 作用的中樞途徑
        1.7 Ghrelin 缺失及其生物學(xué)活性的封閉
            1.7.1 Ghrelin 的敲除
            1.7.2 Ghrelin 作用的拮抗
            1.7.3 GOAT 作用的抑制
        1.8 Ghrelin 受體 GHSR 的研究進(jìn)展
            1.8.1 GHSR 的基因、蛋白結(jié)構(gòu)及相關(guān)功能
            1.8.2 GHSR 組織分布
        1.9 Ghrelin 與泌乳
        1.10 展望
    第二章 泌乳調(diào)節(jié)研究進(jìn)展
        2.1 泌乳的啟動(dòng)、維持和排乳
        2.2 泌乳調(diào)節(jié)的相關(guān)激素
            2.2.1 P 的調(diào)節(jié)作用
            2.2.2 E 的調(diào)節(jié)作用
            2.2.3 GCS 的調(diào)節(jié)作用
            2.2.4 PRL 的調(diào)節(jié)作用
            2.2.5 GH 的調(diào)節(jié)作用
            2.2.6 氫化可的松的調(diào)節(jié)作用
            2.2.7 INS 的調(diào)節(jié)作用
            2.2.8 胰高血糖素的調(diào)節(jié)作用
            2.2.9 Ghrelin 的調(diào)節(jié)作用
        2.3 本研究的目的和意義
實(shí)驗(yàn)研究
    第三章 Ghrelin 和 GHSR-1a 在奶山羊體內(nèi)的表達(dá)
        3.1 材料
            3.1.1 樣品采集
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 主要儀器
        3.2 方法
            3.2.1 組織總 RNA 的提取
            3.2.2 cDNA 合成
            3.2.3 PCR 擴(kuò)增
            3.2.4 qRT-PCR 檢測(cè)
            3.2.5 WB 檢測(cè)
            3.2.6 IHC 染色
            3.2.7 數(shù)據(jù)分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 Ghrelin 和 GHSR-1a mRNA 在奶山羊體內(nèi)的表達(dá)
            3.3.2 Ghrelin 和 GHSR-1a mRNA 在各組織表達(dá)水平
            3.3.3 Ghrelin 和 GHSR-1a 在奶山羊消化道的分布
            3.3.4 Ghrelin 和 GHSR-1a 蛋白表達(dá)水平
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 Ghrelin 和 GHSR-1a 在泌乳期奶山羊乳腺組織的表達(dá)及變化規(guī)律
        4.1 材料
            4.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            4.1.2 樣品采集
            4.1.3 主要試劑
            4.1.4 主要儀器
        4.2 方法
            4.2.1 組織總 RNA 的提取
            4.2.2 cDNA 合成
            4.2.3 PCR 擴(kuò)增
            4.2.4 qRT-PCR 檢測(cè)
            4.2.5 WB 檢測(cè)
            4.2.6 IHC 染色
            4.2.7 免疫熒光染色（immunofluorescence，IF）
            4.2.8 數(shù)據(jù)分析
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 泌乳期奶產(chǎn)量曲線圖
            4.3.2 Ghrelin、GHSR-1a 和β-casein 基因轉(zhuǎn)錄檢測(cè)
            4.3.3 β-casein 的溶解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線
            4.3.4 Ghrelin、GHSR-1a 和β-casein 基因轉(zhuǎn)錄水平
            4.3.5 Ghrelin 及其受體 GHSR-1a 免疫陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè)
            4.3.6 Ghrelin、GHSR-1a 和β-casein 蛋白表達(dá)水平
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 泌乳期奶山羊 Ghrelin、GHSR-1a、GH、GHRH 和 SST 的變化規(guī)律
        5.1 材料
            5.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            5.1.2 樣品采集
            5.1.3 主要試劑
            5.1.4 主要儀器
        5.2 方法
            5.2.1 組織總 RNA 的提取
            5.2.2 cDNA 合成
            5.2.3 PCR 擴(kuò)增
            5.2.4 qRT-PCR 檢測(cè)
            5.2.5 WB 檢測(cè)
            5.2.6 數(shù)據(jù)分析
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 GH、GHRH 和 SST 引物檢測(cè)結(jié)果
            5.3.2 GH、GHRH 和 SST 的溶解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線
            5.3.3 Ghrelin、GHSR-1a、GH、GHRH 和 SST 基因轉(zhuǎn)錄水平
            5.3.4 Ghrelin、GHSR-1a、GH、GHRH 和 SST 蛋白表達(dá)水平
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
    第六章 Ghrelin 對(duì)奶山羊乳腺組織分泌β-casein 的影響
        6.1 材料
            6.1.1 樣品
            6.1.2 主要試劑
            6.1.3 主要儀器
        6.2 方法
            6.2.1 乳腺組織的獲取
            6.2.2 乳腺組織塊的培養(yǎng)及處理
            6.2.3 組織總 RNA 的提取
            6.2.4 cDNA 的合成
            6.2.5 qRT-PCR 檢測(cè)
            6.2.6 WB 檢測(cè)
            6.2.7 數(shù)據(jù)分析
        6.3 結(jié)果
            6.3.1 梯度濃度 Ghrelin 處理乳腺組織后β-casein 基因轉(zhuǎn)錄水平
            6.3.2 同一濃度 Ghrelin 處理乳腺組織不同時(shí)間β-casein 基因轉(zhuǎn)錄水平
            6.3.3 Ghrelin 抑制劑對(duì)乳腺組織β-casein 基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
            6.3.4 梯度濃度 Ghrelin 處理乳腺組織后β-casein 蛋白表達(dá)水平
            6.3.5 同一濃度 Ghrelin 處理乳腺組織不同時(shí)間β-casein 蛋白表達(dá)水平
            6.3.6 Ghrelin 抑制劑對(duì)乳腺組織β-casein 蛋白表達(dá)水平的影響
        6.4 討論
        6.5 小結(jié)
    第七章 Ghrelin 對(duì)奶山羊乳腺上皮細(xì)胞分泌β-casein 的影響
        7.1 材料
            7.1.1 細(xì)胞
            7.1.2 主要試劑
            7.1.3 主要儀器
        7.2 方法
            7.2.1 原代乳腺上皮細(xì)胞的分離
            7.2.2 原代上皮細(xì)胞的處理
            7.2.3 細(xì)胞總 RNA 的提取
            7.2.4 cDNA 合成
            7.2.5 PCR 擴(kuò)增
            7.2.6 qRT-PCR 檢測(cè)
            7.2.7 WB 檢測(cè)
            7.2.8 IF 染色
            7.2.9 ICC 染色
            7.2.10 MTT 檢測(cè)
            7.2.11 數(shù)據(jù)分析
        7.3 結(jié)果
            7.3.1 原代乳腺上皮細(xì)胞鑒定
            7.3.2 Ghrelin 和 GHSR-1a 在原代乳腺上皮細(xì)胞的表達(dá)
            7.3.3 梯度濃度 Ghrelin 處理乳腺上皮細(xì)胞β-casein 基因轉(zhuǎn)錄水平
            7.3.4 Ghrelin 處理乳腺上皮細(xì)胞不同時(shí)間β-casein 基因轉(zhuǎn)錄水平
            7.3.5 Ghrelin 抑制劑對(duì)乳腺上皮細(xì)胞β-casein 基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
            7.3.6 梯度濃度 Ghrelin 處理原代乳腺上皮細(xì)胞β-casein 蛋白表達(dá)水平
            7.3.7 Ghrelin 處理乳腺上皮細(xì)胞不同時(shí)間β-casein 蛋白表達(dá)水平
            7.3.8 Ghrelin 抑制劑對(duì)原代乳腺上皮細(xì)胞β-casein 蛋白表達(dá)水平的影響
            7.3.9 Ghrelin 對(duì)奶山羊原代乳腺上皮細(xì)胞增殖的影響
        7.4 討論
        7.5 小結(jié)
結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
    結(jié)論
    創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
主要縮略詞和中英文對(duì)照表
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3798758