以奶牛乳腺組織為材料,采用3’RACE技術(shù)克隆到奶牛IRS1基因3’UTR的全長,進(jìn)一步對測得的序列進(jìn)行了驗(yàn)證,同時(shí)利用Target Scan 7.0和Pic Tar軟件預(yù)測可能結(jié)合的microRNA,并對多個(gè)軟件預(yù)測結(jié)合的microRNA,進(jìn)行最小結(jié)合自由能分析。結(jié)果表明,成功克隆了1 327 bp的牛IRS1 3’UTR全長,與NCBI上的預(yù)測序列一致率達(dá)到99%;miR-128、miR-96、miR-27a為2個(gè)軟件共同預(yù)測到的結(jié)合microRNA;3個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的最小自由能分別為-89.58、-87.91、-100.88 k J·mol-1,表明牛IRS1基因表達(dá)可能受到這3個(gè)microRNA的調(diào)控。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.2 菌株和試劑
        1.1.3 引物設(shè)計(jì)與合成
    1.2 方法
        1.2.1 牛乳腺組織Total RNA提取
        1.2.2 牛IRS1基因3’UTR的擴(kuò)增
        1.2.3 序列拼接
        1.2.4 牛IRS1基因3’UTR的克隆、鑒定及分析
        1.2.5 序列BLAST比對分析
        1.2.6 靶位點(diǎn)預(yù)測
2 結(jié)果與分析
    2.1 牛乳腺組織Total RNA提取結(jié)果
    2.2 已知序列驗(yàn)證結(jié)果
    2.3 3'端序列獲取結(jié)果
    2.4 RACE序列驗(yàn)證結(jié)果
    2.5 序列拼接和同源比對結(jié)果
    2.6 靶位點(diǎn)預(yù)測及同源性分析
3 討論



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