H9N2亞型禽流感(AI)持續(xù)在我國雞群中廣泛流行,不僅可以感染禽類,還可以感染哺乳動物以及人類,為了明確山東及周邊養(yǎng)殖場H9N2亞型禽流感病毒(AIV)的分子進化情況及其致病性,本研究在2016年²019年間從山東及周邊養(yǎng)殖場病雞、病鴨等分離鑒定出37株H9N2 AIV,經病毒純化后,將病毒各基因片段進行RT-PCR擴增和克隆測序,獲得各分離株全基因組序列,并進行遺傳演化和重要的氨基酸位點的變異分析。結果顯示:37株H9N2 AIV 8個基因片段均屬于歐亞譜系,但8個基因片段的分子進化關系呈現出基因多樣性:37株HA和NA基因來自Y280-like;HA基因之間的核苷酸同源性為92.2%⁹9.9%,NA基因之間的核苷酸同源性為90.6%⁹9.9%;M、NS基因來自G1-like;PA、NP、PB1基因來自F98-like;PB2基因來自G9-like。HA蛋白的受體結合位點149、198、234和235位點變異最多,37株分離株HA第234位氨基酸(相當于H3第226位氨基酸)全部由Q突變?yōu)長,235位點全部突變?yōu)镸,...

【文章頁數】：96 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號說明
第一部分 文獻綜述
    1 禽流感病毒概述
        1.1 流感病毒特點與分類
        1.2 流感病毒的流行史
        1.3 主要蛋白
    2 流感病毒受體
    3 H9N2 AIV突變及致病性
    4 分子模擬技術在流感病毒突變研究中的應用
    5 研究目的和意義
第二部分 試驗研究
    第一章 H9N2 亞型AIV的全基因組測序、遺傳進化與抗原變異分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 引物設計
            1.3 H9N2 亞型AIV的鑒定
            1.4 病毒的純化
            1.5 提取病毒RNA
            1.6 PCR產物膠回收
            1.7 連接與轉化
            1.8 菌液PCR鑒定
            1.9 序列分析
            1.10 H9N2 AIV抗原性分析
        2 結果與分析
            2.1 病毒的分離與鑒定
            2.2 序列測序結果
            2.3 抗原性分析結果
        3 討論
        4 小結
    第二章 H9N2 亞型AIV的致病性分析
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 H9N2 AIV的生物學測定
            1.3 H9N2 AIV感染SPF雞的研究
            1.4 H9N2 AIV感染BALB/c雌鼠的研究
        2 結果與分析
            2.1 雞胚半數感染量(EID50)測定結果
            2.2 組織半數感染量(TCID50)測定
            2.3 H9N2 AIV感染SPF雞的研究
            2.4 H9N2 AIV感染BALB/c雌鼠的研究
        3 討論
        4 小結
    第三章 HA關鍵突變位點預測與HA差異互作宿主蛋白篩選
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 受體結合位點關鍵氨基酸突變位點預測
            1.3 突變質粒的構建
            1.4 突變病毒的拯救及鑒定
            1.5 突變毒株TCID50測定
            1.6 突變毒株復制動力學
            1.7 H9N2 AIV變異HA蛋白差異互作宿主蛋白篩選
        2 結果與分析
            2.1 HA受體結合位點關鍵氨基酸突變位點預測結果
            2.2 突變毒株拯救結果
            2.3 突變毒株TCID50測定結果
            2.4 突變株CK/SD/903(N218Q)復制動力學
            2.5 H9N2 AIV變異HA蛋白互作宿主差異蛋白鑒定結果
        3 討論
        4 小結
結論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表的學術論著
附錄
參與課題情況



本文編號：3790251