奶牛乳腺炎是影響奶牛養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的最嚴(yán)重的制約因素之一,給整個(gè)產(chǎn)業(yè)鏈帶來(lái)了嚴(yán)重的危害。本研究通過(guò)采集江蘇、山東多家奶牛場(chǎng)乳腺炎奶樣和常規(guī)奶樣,開(kāi)展奶牛乳腺炎流行病學(xué)調(diào)查,利用細(xì)菌學(xué)方法分離培養(yǎng)病原菌,16S rDNA測(cè)序鑒定,確定采樣牧場(chǎng)乳腺炎病原菌流行狀況,建立小型病原菌菌種庫(kù),結(jié)合奶牛場(chǎng)DHI測(cè)定,分析細(xì)菌感染模式和乳品質(zhì)性狀的相關(guān)性,在藥敏試驗(yàn)基礎(chǔ)上,檢測(cè)主要流行菌肺炎克雷伯桿菌的耐藥基因,為揭示奶牛乳腺炎病原菌感染規(guī)律和耐藥機(jī)制,開(kāi)展奶牛乳腺炎抗性選育提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究主要包括以下幾個(gè)方面。一、奶牛乳腺炎病原菌的分離和16S rDNA基因序列分析鑒定:對(duì)江蘇、山東等地牧場(chǎng)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,分離和鑒定乳腺炎病原菌。隨機(jī)采集牧場(chǎng)1、牧場(chǎng)2、牧場(chǎng)3、和牧場(chǎng)4的常規(guī)乳樣共882份(n1=223,n2=220,n3=193,n4=246),利用細(xì)菌學(xué)和16s rDNA測(cè)序確定病原菌種屬。結(jié)果顯示:牧場(chǎng)1的乳腺炎樣本分離出11種病原菌39株;牧場(chǎng)2的乳腺炎樣本分離出15種病原菌38株;牧場(chǎng)的乳腺炎樣本分離出6種病原菌12株;牧場(chǎng)4乳腺炎樣本分離出3種病原菌4株。牧場(chǎng)1的常規(guī)奶樣分離出3...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
Abstract
詞匯縮略表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 奶牛乳腺炎的分類(lèi)及其致病菌
        1.1 奶牛乳腺炎的簡(jiǎn)介
        1.2 奶牛乳腺炎的分類(lèi)
            1.2.1 隱性乳腺炎
            1.2.2 臨床型乳腺炎
        1.3 奶牛乳腺炎的病原學(xué)特點(diǎn)
        1.4 乳腺炎病原菌致病機(jī)理研究進(jìn)展
        1.5 乳腺炎病原菌分離鑒定方法研究進(jìn)展
            1.5.1 傳統(tǒng)細(xì)菌分離培養(yǎng)
            1.5.2 普通PCR技術(shù)
            1.5.3 多重PCR技術(shù)
            1.5.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)
            1.5.5 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)
            1.5.6 脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)(PFGE)
            1.5.7 基因芯片(Gene Chip, DNA Chip, cDNA Microaaray)
            1.5.8 16s rDNA測(cè)序技術(shù)
            1.5.9 高通量測(cè)序技術(shù)(High-throughput sequencing)
    2 細(xì)菌耐藥機(jī)制
        2.1 抗生素外排泵
        2.2 抗生素降解/修飾
        2.3 自身靶點(diǎn)重編
        2.4 抗性傳播
            2.4.1 細(xì)菌的可移動(dòng)遺傳元件
            2.4.2 可移動(dòng)遺傳元件的生物學(xué)意義
            2.4.3 可移動(dòng)遺傳元件的識(shí)別和鑒定
    3 肺炎克雷伯桿菌的研究進(jìn)展
        3.1 肺炎克雷伯桿菌分子流行病學(xué)調(diào)查
        3.2 肺炎克雷伯桿菌引發(fā)奶牛乳腺炎癥狀
        3.3 肺炎克雷伯桿菌的致病性
        3.4 肺炎克雷伯桿菌耐藥性
    5 本研究的目的和意義
第二章 奶牛乳腺炎病原菌的分離和16S rDNA基因序列分析鑒定
    1 材料與方法
        1.1 試劑與藥品
        1.2 主要儀器
        1.3 奶樣采集
        1.4 分離致病菌
        1.5 引物的合成
        1.6 病原菌DNA的提取
        1.7 PCR擴(kuò)增和檢測(cè)
    2 結(jié)果
        2.1 四個(gè)地區(qū)乳腺炎病原菌分離的結(jié)果
        2.2 四個(gè)地區(qū)非乳腺炎病原菌分離的結(jié)果
    3 討論
第三章 奶牛乳腺炎病原菌感染模式與乳成分性狀的關(guān)系
    1 材料與方法
        1.1 試劑與藥品
        1.2 主要儀器
        1.3 奶樣采集
        1.4 DHI的數(shù)據(jù)收集
        1.5 細(xì)菌感染模式
        1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果
        2.1 奶樣細(xì)菌感染模式
        2.2 不同感染模式對(duì)奶樣乳成分變化的影響
        2.3 奶樣不同SCC范圍對(duì)乳成分變化的影響
    3 討論
第四章 乳腺炎病原菌的藥敏試驗(yàn)
    1 材料與方法
        1.1 試劑與藥品
        1.2 主要儀器
        1.3 培養(yǎng)基的制備
        1.4 菌株的復(fù)蘇
        1.5 藥敏試驗(yàn)
    2 結(jié)果
    3 討論
第五章 肺炎克雷伯桿菌的耐藥基因的分子流行病學(xué)研究
    1 材料與方法
        1.1 試劑與藥品
        1.2 主要儀器
        1.3 培養(yǎng)基的制備
        1.4 菌株的復(fù)蘇
        1.5 藥敏試驗(yàn)
        1.6 病原菌DNA的提取
        1.7 引物的合成
        1.8 PCR擴(kuò)增和檢測(cè)
        1.9 序列分析
    2 結(jié)果
        2.1 肺炎克雷伯桿菌的耐藥率
        2.2 肺炎克雷伯桿菌的多重耐藥結(jié)果
        2.3 可移動(dòng)遺傳元件遺傳標(biāo)記檢測(cè)結(jié)果
    3 討論
全文小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1: 其他常規(guī)奶樣的測(cè)序比對(duì)結(jié)果
    附錄2: 28種基因引物序列
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3789738