發(fā)布時間：2023-04-10 21:31

　　鴨坦布蘇病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)在鴨群中傳播迅速,造成病鴨的死亡率在5%-30%之間。該病的發(fā)生和流行給我國的養(yǎng)鴨產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。HMGB1(high mobility group box protein 1,HMGB1)是一種非組蛋白染色質(zhì)相關(guān)的核蛋白,在細胞核內(nèi)具有識別、結(jié)合及改變DNA內(nèi)部結(jié)構(gòu)的能力,最后參與了DNA的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制和修復(fù)等過程。HMGB1可以通過促進樹突狀細胞表達CD40和CD80等細胞標記物,促使DC細胞的成熟和遷移,也在獲得性免疫中扮演著重要角色。本研究探索CRISPR/Cas9慢病毒系統(tǒng)在DEF細胞內(nèi)HMGB1基因的編輯,探索該病毒與宿主先天性免疫的互作機制。本實驗最先使用CRISPR/Cas9方法敲低鴨胚成纖維(Duck embryo fibroblast,DEF)細胞中的鴨HMGB1(Duck HMGB1,duHMGB1)并感染DTMUV,第一次在原胚細胞的基礎(chǔ)上對CRISPR/Cas9系統(tǒng)的活性及HMGB1基因介導(dǎo)DTMUV感染的免疫應(yīng)答機制進行了驗證。以duHMGB1為靶向基因,在DEF細胞敲低duHMGB1基...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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英文摘要
1 前言
    1.1 鴨坦布蘇病毒研究狀況概述
        1.1.1 鴨坦布蘇病毒的概述
        1.1.2 DTMUV的命名
        1.1.3 DTMUV的分類
        1.1.4 DTMUV的病原學(xué)特征
        1.1.5 DTMUV的傳播性
        1.1.6 鴨坦布蘇病毒病的流行病學(xué)
        1.1.7 鴨坦布蘇病毒病的診斷
        1.1.8 鴨坦布蘇病毒病的防治
    1.2 HMGB1研究狀況概述
        1.2.1 HMGB1概述
        1.2.2 HMGB1作用機制
        1.2.3 HMGB1的釋放機制
        1.2.4 HMGB1的信號通路
    1.3 CRISPR研究狀況概述
        1.3.1 CRISPR的發(fā)展史
        1.3.2 CRISPR的分類
        1.3.3 CRISPR的作用機制
    1.4 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒株和細胞
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要溶液的配制
        2.1.4 主要設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 DEF細胞的制備
        2.2.2 PCR反應(yīng)測定
        2.2.3 Du HMGB1慢病毒體外感染
        2.2.4 du HMGB1慢病毒體外感染與DTMUV感染
        2.2.5 c DNA合成
        2.2.6 感染DTMUV的DEF細胞(敲低du HMGB1)中IFN-Ⅰ(IFN-α,IFN-β)和ISGs(PKR,Mx,OAS)m RNA表達量的變化。
3 結(jié)果與分析
    3.1 單載體電泳結(jié)果
    3.2 體外慢病毒感染
    3.3 敲低DEF細胞中du HMGB1后DTMUV復(fù)制情況
    3.4 敲低du HMGB1后感染DTMUV的DEF細胞中IFN-Ⅰ(IFN-α,IFN-β)m RNA表達量的變化
    3.5 敲低du HMGB1后感染DTMUV的DEF細胞中ISGs(PKR,Mx,OAS) m RNA表達量的變化
4 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3788766