發(fā)布時間：2023-04-10 21:31

　　鴨坦布蘇病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)在鴨群中傳播迅速,造成病鴨的死亡率在5%-30%之間。該病的發(fā)生和流行給我國的養(yǎng)鴨產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。HMGB1(high mobility group box protein 1,HMGB1)是一種非組蛋白染色質(zhì)相關(guān)的核蛋白,在細(xì)胞核內(nèi)具有識別、結(jié)合及改變DNA內(nèi)部結(jié)構(gòu)的能力,最后參與了DNA的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制和修復(fù)等過程。HMGB1可以通過促進(jìn)樹突狀細(xì)胞表達(dá)CD40和CD80等細(xì)胞標(biāo)記物,促使DC細(xì)胞的成熟和遷移,也在獲得性免疫中扮演著重要角色。本研究探索CRISPR/Cas9慢病毒系統(tǒng)在DEF細(xì)胞內(nèi)HMGB1基因的編輯,探索該病毒與宿主先天性免疫的互作機(jī)制。本實驗最先使用CRISPR/Cas9方法敲低鴨胚成纖維(Duck embryo fibroblast,DEF)細(xì)胞中的鴨HMGB1(Duck HMGB1,duHMGB1)并感染DTMUV,第一次在原胚細(xì)胞的基礎(chǔ)上對CRISPR/Cas9系統(tǒng)的活性及HMGB1基因介導(dǎo)DTMUV感染的免疫應(yīng)答機(jī)制進(jìn)行了驗證。以duHMGB1為靶向基因,在DEF細(xì)胞敲低duHMGB1基...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 鴨坦布蘇病毒研究狀況概述
        1.1.1 鴨坦布蘇病毒的概述
        1.1.2 DTMUV的命名
        1.1.3 DTMUV的分類
        1.1.4 DTMUV的病原學(xué)特征
        1.1.5 DTMUV的傳播性
        1.1.6 鴨坦布蘇病毒病的流行病學(xué)
        1.1.7 鴨坦布蘇病毒病的診斷
        1.1.8 鴨坦布蘇病毒病的防治
    1.2 HMGB1研究狀況概述
        1.2.1 HMGB1概述
        1.2.2 HMGB1作用機(jī)制
        1.2.3 HMGB1的釋放機(jī)制
        1.2.4 HMGB1的信號通路
    1.3 CRISPR研究狀況概述
        1.3.1 CRISPR的發(fā)展史
        1.3.2 CRISPR的分類
        1.3.3 CRISPR的作用機(jī)制
    1.4 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒株和細(xì)胞
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要溶液的配制
        2.1.4 主要設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 DEF細(xì)胞的制備
        2.2.2 PCR反應(yīng)測定
        2.2.3 Du HMGB1慢病毒體外感染
        2.2.4 du HMGB1慢病毒體外感染與DTMUV感染
        2.2.5 c DNA合成
        2.2.6 感染DTMUV的DEF細(xì)胞(敲低du HMGB1)中IFN-Ⅰ(IFN-α,IFN-β)和ISGs(PKR,Mx,OAS)m RNA表達(dá)量的變化。
3 結(jié)果與分析
    3.1 單載體電泳結(jié)果
    3.2 體外慢病毒感染
    3.3 敲低DEF細(xì)胞中du HMGB1后DTMUV復(fù)制情況
    3.4 敲低du HMGB1后感染DTMUV的DEF細(xì)胞中IFN-Ⅰ(IFN-α,IFN-β)m RNA表達(dá)量的變化
    3.5 敲低du HMGB1后感染DTMUV的DEF細(xì)胞中ISGs(PKR,Mx,OAS) m RNA表達(dá)量的變化
4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3788766