本研究對DPV UL22基因進行了分子特性分析、克隆、原核表達、蛋白純化、多克隆抗體的制備、細胞內的定位及真核表達研究,獲如下結果：1.鴨瘟病毒UL22基因的生物信息學分析通過生物信息學分析工具對UL22基因核苷酸序列、編碼蛋白gH及與其它皰疹病毒的同源性作了分析。結果表明UL22基因為2505bp,分子量92.5433kDa,編碼834個氨基酸,有一條信號肽和兩個跨膜區(qū),還含有8個N-糖基化位點和52個潛在的磷酸化位點,抗原位點較多,gH蛋白的分子之間形成了三個二硫鍵。同源性分析表明gH蛋白在皰疹病毒中是非常保守的,且與馬立克病毒屬的MeHV-1.GaHV-2和GaHV-3 UL22基因的同源性最高。2.鴨瘟病毒截段基因的原核表達及抗體的制備根據(jù)生物信息學預測結果,去除掉gH蛋白的信號肽和跨膜區(qū)得到了截段形式的gHt基因,構建了原核表達重組質粒pET32c(+)-gHt,轉化到宿主菌BL21后在37℃、0.2mmol/L IPTG及10h誘導條件下,得到gHt蛋白,該蛋白主要存在于包涵體。純化的gHt蛋白免疫兔子制備的高免血清效價達到1：32,Western blot證實gHt蛋白可...

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
縮略詞及符號表
一、引言
    1 皰疹病毒UL22基因及其編碼糖蛋白gH的研究進展
        1.1 皰疹病毒的基本特征
        1.2 UL22基因序列及其編碼蛋白的結構特點
            1.2.1 UL22基因序列特點
            1.2.2 糖蛋白gH的特點
            1.2.3 糖蛋白gH的功能域
        1.3 皰疹病毒糖蛋白gH的功能
            1.3.1 介導病毒的入侵和細胞間的傳播
            1.3.2 在膜融合過程中的作用
            1.3.3 抗原性
            1.3.4 抗病毒作用
        1.4 皰疹病毒糖蛋白gH與其它蛋白的相互作用
            1.4.1 糖蛋白gH和gL的相互作用
            1.4.2 糖蛋白gH與gE的相互作用
            1.4.3 第三蛋白與gH/gL復合體的相互作用
        1.5 展望
    2 選題目的及意義
二、實驗研究
    1 實驗材料
        1.1 基因序列
        1.2 毒株、菌種、載體及細胞
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑的配制
        1.5 主要儀器
        1.6 實驗動物
    2 實驗方法
        2.1 DPV UL22基因序列及其編碼蛋白的生物信息學分析
            2.1.1 DPV UL22基因的核苷酸序列分析
            2.1.2 DPV UL22基因編碼蛋gH的生物信息學分析
            2.1.3 同源性分析
        2.2 DPV UL22基因的克隆表達、蛋白純化及多抗制備
            2.2.1 DPV UL22基因的克隆
            2.2.2 UL22截段基因gHt重組原核表達質粒的構建
            2.2.3 重組蛋白gHt的誘導表達及條件優(yōu)化
            2.2.4 重組蛋白gHt的純化及鑒定
            2.2.5 兔抗DPV gHt多克隆抗體的制備
        2.3 DPV UL22編碼蛋白gH在感染DEF中的定位分析
            2.3.1 間接免疫熒光檢測DPV gH蛋白在DEF的定位
            2.3.2 gH蛋白在細胞內定位的動態(tài)分析
        2.4 DPV gH和gHt真核表達載體的構建及表達分析
            2.4.1 DPV UL22基因和UL22截段基因重組真核表達質粒的構建
            2.4.2 HEK293細胞的培養(yǎng)
            2.4.3 重組質粒pCMV-HA-gH和pCMV-HA-gHt轉染HEK293細胞
            2.4.4 重組質粒的表達分析
    3 實驗結果
        3.1 DPV UL22基因序列及其編碼蛋白的生物信息學分析結果
            3.1.1 DPV UL22基因的核苷酸序列分析結果
            3.1.2 DPV UL22基因編碼蛋白gH的生物信息學分析結果
            3.1.3 同源性分析結果
        3.2 DPV UL22基因的克隆表達、蛋白純化及多抗制備結果
            3.2.1 DPV UL22基因及截段UL22基因的克隆與鑒定
            3.2.2 原核表達重組質粒pET32c(+)-gHt的構建與鑒定
            3.2.3 gHt的誘導表達及條件優(yōu)化
            3.2.4 重組蛋白gHt的純化與鑒定
            3.2.5 多抗的制備與鑒定
        3.3 DPV UL22編碼蛋白gH在感染DEF中的定位分析
            3.3.1 特異性試驗結果
            3.3.2 DPV gH蛋白在感染病毒的宿主細胞中的定位分析及動態(tài)檢測
        3.4 DPV gH和gHt真核表達載體的構建及表達分析
            3.4.1 重組質粒pCMV-HA-gH和pCMV-HA-gHt的構建及鑒定
            3.4.2 重組質粒pCMV-HA-gH和pCMV-HA-gHt的表達分析
    4 分析討論
        4.1 DPV UL22基因序列及其編碼蛋白的生物信息學分析
        4.2 DPV UL22基因的克隆表達、蛋白純化及多抗制備
            4.2.1 引物的設計
            4.2.2 重組質粒的構建
            4.2.3 蛋白的表達、純化及多抗的制備
        4.3 DPV UL22編碼蛋白gH在感染DEF中的定位分析
        4.4 DPV gH和gHt真核表達載體的構建及表達分析
三、結論
參考文獻
致謝
作者簡介及攻讀碩士學位期間學術論文發(fā)表



本文編號：3785581