【背景】鴨瘟和鴨坦布蘇病毒是鴨的兩種重要傳染病,鴨瘟屬于皰疹病毒科,具有開(kāi)發(fā)成病毒載體的優(yōu)勢(shì)。為了優(yōu)化鴨坦布蘇病毒E基因在重組鴨瘟病毒載體中的表達(dá),之前探討了不同形式鴨坦布蘇病毒E蛋白在重組鴨瘟病毒載體中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)以鴨為宿主進(jìn)行密碼子優(yōu)化的E基因C端截短形式(E451-dk,簡(jiǎn)稱(chēng)為Es)表達(dá)量最高。【目的】探討不同啟動(dòng)子對(duì)Es在重組鴨瘟病毒載體中表達(dá)的影響,為鴨瘟病毒—坦布蘇病毒二聯(lián)苗的研制奠定基礎(chǔ)。【方法】將pCAG、 pSV40、pRSV、p1.8k(MDV)和pgB(MDV)啟動(dòng)子通過(guò)常規(guī)基因克隆的方法替換轉(zhuǎn)移載體pEP-BGH-Es中的pCMV啟動(dòng)子,構(gòu)建不同啟動(dòng)子調(diào)控Es表達(dá)的重組表達(dá)框pro-Es-BGH-pA。在鴨瘟病毒(DEV)疫苗株細(xì)菌人工染色體克隆pDEV-EF1的基礎(chǔ)上,將5個(gè)重組表達(dá)框分別通過(guò)"Red E/T兩步重組"克隆至pDEV-EF1突變體的US7和US8基因之間,構(gòu)建了攜帶不同啟動(dòng)子調(diào)控的Es突變體克隆pDEV-pro-Es。用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染雞胚成纖維細(xì)胞(CEFs)拯救獲得相應(yīng)重組病毒rDEV-pro-Es,并對(duì)重組病毒感染細(xì)胞蝕斑大小和Es蛋白表達(dá)情...

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 菌株、質(zhì)粒和病毒
    1.2 主要試劑
    1.3 細(xì)胞
    1.4 TUMV E蛋白DIII結(jié)構(gòu)域多克隆抗體的制備
    1.5 引物設(shè)計(jì)及合成
    1.6 p EP-pro-Es質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.7 重組鴨瘟病毒突變體BAC克隆的構(gòu)建
    1.8 重組病毒的拯救
    1.9 重組病毒蝕斑大小的測(cè)定
    1.1 0 TUMV E蛋白DIII和DEV UL44多克隆抗體效價(jià)測(cè)定
    1.1 1 蛋白表達(dá)分析
2 結(jié)果
    2.1 重組鴨瘟病毒BAC突變體克隆的鑒定
    2.2 重組病毒的拯救
    2.3 病毒蝕斑面積測(cè)定
    2.4 外源蛋白Es表達(dá)分析
3 討論
4 結(jié)論



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