病毒性傳染病如非典型性肺炎、禽流感、艾滋病等嚴(yán)重威脅到人們的健康。病毒的快速高靈敏檢測對于科學(xué)應(yīng)對病毒性傳染病、有效地控制病毒的擴(kuò)散和傳播等方面有著重要的意義。然而,目前病毒檢測的方法：如病毒的分離和鑒定、血清學(xué)檢測方法以及酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)操作繁瑣、費(fèi)時、靈敏度低；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)靈敏度較高,但是該方法需要昂貴的試劑、專門的操作人員以及專業(yè)的儀器,不適用于病毒的現(xiàn)場檢測。 電化學(xué)免疫分析方法是一種新型的免疫分析法,它將免疫反應(yīng)的高選擇性與電化學(xué)檢測的高靈敏性相結(jié)合,具有高靈敏度、低成本、低能耗、易于微型化等優(yōu)點(diǎn),因此受到了科研工作者的廣泛關(guān)注。納米材料由于其在光、電、磁等方面的獨(dú)特性能,可以大大提高生物傳感器的性能。其中,磁性納米顆(MBs)由于其大的比表面積、快速的反應(yīng)動力學(xué)以及好的分離富集能力而被廣泛地應(yīng)用于免疫分析中。采用磁球作為免疫反應(yīng)的載體不僅可以簡化預(yù)處理過程,減少免疫反應(yīng)時間,同時還可以放大檢測信號。因此免疫磁分離在細(xì)胞分離、病原體檢測等方面得到了越來越廣泛的應(yīng)用。本工作將免疫磁分離和酶催化放大相結(jié)合,發(fā)展了幾種適用于現(xiàn)場的病毒快速檢測方法,主要包括以...

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
論文創(chuàng)新點(diǎn)
摘要
Abstract
英文縮略表
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 禽流感及禽流感病毒概述
        1.2.1 禽流感病毒的結(jié)構(gòu)及分類
        1.2.2 病毒的檢測方法
    1.3 電化學(xué)免疫分析法和電化學(xué)免疫傳感器
        1.3.1 電化學(xué)免疫分析法的原理
        1.3.2 電化學(xué)免疫傳感器的分類
        1.3.3 電化學(xué)免疫分析中的信號標(biāo)記及其放大策略
    1.4 基于磁球的電化學(xué)免疫分析法
        1.4.1 基于磁球的電化學(xué)免疫分析法的分類
        1.4.2 小結(jié)
    1.5 本論文的出發(fā)點(diǎn)與主要工作
    參考文獻(xiàn)
第2章 基于免疫磁分離和酶催化放大的禽流感病毒電化學(xué)免疫傳感器
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        2.2.2 磁性金電極的設(shè)計(jì)和制作
        2.2.3 辣根過氧化物酶修飾磁球(HRP-MB)的制備
        2.2.4 免疫磁球的制備與表征
        2.2.5 生物素化抗體的制備
        2.2.6 H9N2禽流感病毒的檢測步驟
        2.2.7 特異性實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 復(fù)雜樣品中禽流感病毒的檢測
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 基于磁球的電化學(xué)免疫傳感器檢測H9N2禽流感病毒的原理
        2.3.2 免疫磁球的表征
        2.3.3 HRP-MB在磁性電極上的電化學(xué)信號
        2.3.4 檢測條件的優(yōu)化
        2.3.5 禽流感病毒的檢測
        2.3.6 方法的特異性
        2.3.7 雞糞樣品中H9N2禽流感病毒的檢測
        2.3.8 與直接在電極上構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器相比較
    2.4 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第3章 基于免疫磁分離和雙酶放大的禽流感病毒電化學(xué)免疫傳感器
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        3.2.2 磁性電極的制作、修飾和表征
        3.2.3 葡萄糖氧化酶修飾磁球(HRP-MB)的制備
        3.2.4 基于磁球的雙酶放大法檢測H9N2禽流感病毒
        3.2.5 特異性實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 復(fù)雜樣品中H9N2禽流感病毒的檢測
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 層層自組裝電極的表征
        3.3.2 A-(Con A/HRP)₃電極表面所固定的HRP米氏常數(shù)的計(jì)算
        3.3.3 A-(Con A/HRP)₃電極的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性
        3.3.4 GOD-MB在HRP修飾磁性電極上的電化學(xué)信號
        3.3.5 檢測條件的優(yōu)化
        3.3.6 采用基于磁球的雙酶放大法檢測H9N2禽流感病毒
        3.3.7 方法的特異性
        3.3.8 復(fù)雜樣品中H9N2禽流感病毒的檢測
        3.3.9 方法的普適性
    3.4 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第4章 基于免疫磁分離和酶促金屬化的禽流感病毒電化學(xué)免疫傳感器
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        4.2.2 磁性電極的設(shè)計(jì)和制作
        4.2.3 禽流感病毒的檢測
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 檢測原理
        4.3.2 影響基于酶促金屬化電化學(xué)信號的因素
        4.3.3 禽流感病毒的檢測
        4.3.4 酶催化信號與酶促金屬化信號的比較
        4.3.5 與直接在電極上構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器相比較
        4.3.6 基于酶促金屬化和雙電極信號轉(zhuǎn)換的信號放大策略
    4.4 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第5章 基于酶促金屬化的比色分析法以及禽流感病毒的可視化檢測
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)部分
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        5.2.2 納米金的制備及表征
        5.2.3 酶促金屬化反應(yīng)機(jī)理
        5.2.4 堿性磷酸酶的檢測
        5.2.5 禽流感病毒的檢測
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 基于酶促金屬化檢測堿性磷酸酶的原理
        5.3.2 基于酶促金屬化檢測堿性磷酸酶的反應(yīng)機(jī)理探討
        5.3.3 堿性磷酸酶的檢測
        5.3.4 可視化檢測禽流感病毒
    5.4 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第6章 總結(jié)與展望
    6.1 主要工作
    6.2 展望
附錄：攻讀博士學(xué)位期間已發(fā)表和待發(fā)表的科研成果
致謝



本文編號：3784425