目的:本研究將干擾素和補(bǔ)體C3d主要片段進(jìn)行串聯(lián)表達(dá),以研究共同刺激細(xì)胞的活性,觀察它們的免疫佐劑效應(yīng),以期獲得一種更高效的免疫佐劑。方法:本實(shí)驗(yàn)合成了chIFN-γ、chIFN-γ-C3d基因,利用pET29a(+)構(gòu)建重組載體,并在大腸桿菌BL21中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。將重組蛋白純化后進(jìn)行雞胚內(nèi)抗新城疫病毒活性研究;并與DNA疫苗共同免疫雛雞,HI法測(cè)定抗體水平,MTT法測(cè)定淋巴細(xì)胞增殖情況,并分析免疫器官指數(shù)變化。結(jié)果:成功表達(dá)純化了chIFN-γ和chIFN-γ-C3d兩個(gè)蛋白,SDS-PAGE電泳檢測(cè)分子量分別約為17 kD和21 kD,His標(biāo)簽抗體檢測(cè)表明蛋白表達(dá)正確。雞胚內(nèi)抗病毒活性測(cè)定表明一定濃度的chIFN-γ和chIFN-γ-C3d均可以抑制新城疫病毒的增殖,低濃度時(shí)chIFN-γ-C3d抗病毒活性高于chIFN-γ;與DNA疫苗聯(lián)合免疫后,HA組、γ+HA和γ+C+HA組抗體水平持續(xù)升高,且與HA組相比,γ+C+HA組抗體水平更高,差異有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。第7周開始γ+C+HA組的抗體水平均高于γ+HA組,差異有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因的設(shè)計(jì)合成
        1.2.2 融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        1.2.3 雞胚內(nèi)抗病毒活性測(cè)定
        1.2.4 免疫佐劑效應(yīng)測(cè)定
2 結(jié)果
    2.1 重組載體的雙酶切及測(cè)序鑒定結(jié)果
    2.2 重組蛋白表達(dá)檢測(cè)和Western blot鑒定
    2.3 重組蛋白chIFN-γ-C3d表達(dá)條件的優(yōu)化
    2.4 雞胚內(nèi)抗病毒活性測(cè)定結(jié)果
    2.5 雞體內(nèi)HI抗體水平檢測(cè)結(jié)果
    2.6 雞淋巴細(xì)胞MTT檢測(cè)結(jié)果
    2.7 雞免疫器官增長(zhǎng)指數(shù)測(cè)定結(jié)果
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