貓皰疹病毒I型(Feline Herpesvirus 1),是α-皰疹病毒亞科,水泡病毒屬的成員,主要引起貓的病毒性鼻氣管炎。FHV-1只有一個(gè)血清型,且感染譜很窄,通常只感染貓科動(dòng)物(包括虎、豹等)。臨床上,FHV-1感染可引起為高熱、食欲減退、流涎、出現(xiàn)眼鼻分泌物,嚴(yán)重的還會(huì)導(dǎo)致結(jié)膜炎甚至失明。與其他皰疹病毒類似,潛伏感染也是本病的一個(gè)典型特征,因此沒(méi)有明顯癥狀的病貓也是一個(gè)重要的潛在傳染源。針對(duì)病毒感染,宿主細(xì)胞激活各種抗病毒防御機(jī)制來(lái)抑制病毒復(fù)制。雖然貓皰疹病毒1型(FHV-1)通過(guò)多種不同的方式調(diào)控宿主的早期先天免疫反應(yīng),但宿主可以通過(guò)未知的機(jī)制再次激活抗病毒反應(yīng)來(lái)對(duì)抗病毒入侵。microRNA(miRNA)作為宿主的一類調(diào)節(jié)因子,可以參與調(diào)節(jié)宿主天然免疫應(yīng)答來(lái)對(duì)抗病毒感染。為了探究miRNAs在FHV-1感染中的重要作用,我們利用Illumina高通量測(cè)序的方法對(duì)貓腎細(xì)胞系(CRFK)感染FHV-1前后的小RNA文庫(kù)進(jìn)行了測(cè)序。通過(guò)生物信息學(xué)分析首次發(fā)現(xiàn)了11個(gè)來(lái)源于FHV-1基因組的vmiRNA前體莖環(huán)結(jié)構(gòu),共編碼19個(gè)vmiRNAs成熟體。與其他α-皰疹病毒相似,vmi...

【文章頁(yè)數(shù)】：113 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 貓皰疹病毒Ⅰ型概述
        1.1.1 貓皰疹病毒Ⅰ型的病原學(xué)特性
        1.1.2 貓皰疹病毒Ⅰ型的流行病學(xué)概況
        1.1.3 貓皰疹病毒Ⅰ型的臨床癥狀
        1.1.4 貓皰疹病毒Ⅰ型的致病機(jī)理
        1.1.5 貓皰疹病毒Ⅰ型的潛伏感染
        1.1.6 貓皰疹病毒Ⅰ型的診斷
        1.1.7 貓皰疹病毒Ⅰ型的治療
        1.1.8 貓皰疹病毒Ⅰ型的防控
    1.2 microRNA(miRNA)綜述
        1.2.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)和產(chǎn)生
        1.2.2 miRNA的作用機(jī)制
        1.2.3 miRNA先天免疫中的調(diào)控作用
        1.2.4 miRNA與病毒的相互作用
        1.2.5 皰疹病毒miRNA研究進(jìn)展
    1.3 目的和意義
第二章 FHV-1 編碼vmiRNA的預(yù)測(cè)與分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 毒株和細(xì)胞
        2.1.2 試劑和耗材
        2.1.3 儀器和設(shè)備
        2.1.4 測(cè)序樣品準(zhǔn)備
        2.1.5 測(cè)序
        2.1.6 測(cè)序結(jié)果分析
        2.1.7 FHV-1 編碼的vmiRNA驗(yàn)證
        2.1.8 FHV-1 編碼的vmiRNA靶基因預(yù)測(cè)和分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估
        2.2.2 測(cè)序結(jié)果分類和注釋
        2.2.3 FHV-1 編碼的vmiRNA的預(yù)測(cè)和分析
        2.2.4 FHV-1 編碼的vmiRNA的驗(yàn)證
        2.2.5 FHV-1 編碼的vmiRNA靶基因的預(yù)測(cè)和分析
    2.3 討論
第三章 宿主miRNA表達(dá)譜的分析與鑒定
    3.1 材料和方法
        3.1.1 毒株、細(xì)胞
        3.1.2 試劑和耗材
        3.1.3 儀器和設(shè)備
        3.1.4 測(cè)序樣品準(zhǔn)備及小RNA文庫(kù)的構(gòu)建
        3.1.5 共有及特有序列分析
        3.1.6 已知宿主miRNA表達(dá)譜分析
        3.1.7 宿主miRNA的表達(dá)豐度分析
        3.1.8 新miRNA的預(yù)測(cè)和堿基偏好性分析
        3.1.9 差異表達(dá)的宿主miRNA分析
        3.1.10 差異表達(dá)的宿主miRNA驗(yàn)證
        3.1.11 差異表達(dá)的宿主miRNA靶基因預(yù)測(cè)和分析
        3.1.12 宿主miRNA對(duì) FHV-1 復(fù)制的影響
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 共有及特有序列分析
        3.2.2 已知宿主miRNA表達(dá)譜分析
        3.2.3 宿主miRNA的表達(dá)豐度分析
        3.2.4 新miRNA的預(yù)測(cè)和堿基偏好性分析
        3.2.5 差異表達(dá)的宿主miRNA分析和驗(yàn)證
        3.2.6 差異表達(dá)的宿主miRNA靶基因預(yù)測(cè)和分析
        3.2.7 宿主miRNA對(duì) FHV-1 復(fù)制的影響
    3.3 討論
第四章 miR-26a和 miR-101 抑制FHV-1 復(fù)制
    4.1 材料和方法
        4.1.1 毒株、細(xì)胞和載體
        4.1.2 試劑和耗材
        4.1.3 儀器和設(shè)備
        4.1.4 RNA提取
        4.1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        4.1.6 miRNA和 si RNA轉(zhuǎn)染
        4.1.7 病毒蝕斑實(shí)驗(yàn)
        4.1.8 絕對(duì)熒光定量PCR
        4.1.9 Western Blot檢測(cè)
        4.1.10 鼠源UL42多克隆抗體制備
        4.1.11 micro RNA靶基因預(yù)測(cè)及質(zhì)粒構(gòu)建
        4.1.12 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        4.1.13 免疫熒光實(shí)驗(yàn)(IFA)
        4.1.14 FHV-1生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        4.1.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 FHV-1 感染引起miR-26a和 miR-101 表達(dá)上調(diào)
        4.2.2 FHV-1 感染通過(guò)c GAS介導(dǎo)的通路上調(diào)miR-26a和 miR-101 的表達(dá)
        4.2.3 miR-26a和 miR-101 顯著抑制病毒復(fù)制
        4.2.4 miR-26a和 miR-101 增強(qiáng)JAK-STAT抗病毒信號(hào)通路
        4.2.5 miR-26a和 miR-101 參與Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
        4.2.6 miR-26a和 miR-101 靶向SOCS5 基因
        4.2.7 SOCS5 表達(dá)量在FHV-1 感染后顯著降低
        4.2.8 SOCS5 抑制Ⅰ型干擾素信號(hào)通路并促進(jìn)FHV-1 復(fù)制
        4.2.9 miR-26a和 miR-101 通過(guò)調(diào)節(jié)SOCS5 增強(qiáng)Ⅰ型干擾素抗病毒信號(hào)
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 A
附錄 B
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3779628