發(fā)布時(shí)間：2023-04-01 23:34

　　來源于腸隱窩干細(xì)胞的腸小體能模擬體內(nèi)腸上皮復(fù)雜的生理特性,已成為研究宿主與腸道病原相互作用的理想的體外細(xì)胞模型。為探究腸小體能否作為豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)感染模型,本研究從仔豬的回腸組織分離培養(yǎng)隱窩干細(xì)胞,在培養(yǎng)第7 d后能形成具有隱窩-絨毛樣結(jié)構(gòu)的腸小體。分別采用MOI 1、0.1和0.01 TGEV感染腸小體后,通過熒光定量PCR(qPCR)方法檢測(cè)TGEV在腸小體中的復(fù)制情況,結(jié)果顯示腸小體支持TGEV復(fù)制;進(jìn)一步用MOI 1 TGEV感染腸小體后,通過qPCR檢測(cè)并繪制TGEV在腸小體中的病毒復(fù)制曲線,結(jié)果顯示,與2 hpi相比,在12 hpi病毒的mRNA轉(zhuǎn)錄水平增加了321倍,在24 hpi病毒復(fù)制達(dá)到峰值;通過間接免疫熒光(IFA)檢測(cè)TGEV N蛋白的表達(dá),結(jié)果顯示N蛋白的表達(dá)情況與上述mRNA檢測(cè)結(jié)果相符。通過雙熒光標(biāo)記IFA檢測(cè)TGEV N蛋白與腸上皮細(xì)胞類型標(biāo)志物的共定位情況,結(jié)果顯示TGEV能感染多種腸上皮細(xì)胞類型,包括腸細(xì)胞、干細(xì)胞和杯狀細(xì)胞。此外,通過qPCR檢測(cè)TGEV感染腸小體的干擾素(IFN)mRNA轉(zhuǎn)錄水平,結(jié)果顯示TGEV感染腸小體能顯著增...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
    1.2豬3D腸小體的分離培養(yǎng)及2D腸小體的培養(yǎng)
    1.3 不同劑量TGEV感染腸小體的熒光定量PCR(q PCR）檢測(cè)
    1.4 TGEV感染腸小體的病毒復(fù)制曲線測(cè)定
    1.5 TGEV感染腸小體的間接免疫熒光（IFA）檢測(cè)
    1.6 TGEV感染腸上皮細(xì)胞類型的雙熒光標(biāo)記IFA檢測(cè)
    1.7 TGEV感染腸小體誘導(dǎo)IFN產(chǎn)生的q PCR檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 豬腸小體的分離與培養(yǎng)
    2.2 TGEV感染腸小體的病毒復(fù)制檢測(cè)結(jié)果
    2.3 雙熒光標(biāo)記IFA檢測(cè)TGEV感染腸上皮細(xì)胞類型的結(jié)果
    2.4 TGEV感染腸小體誘導(dǎo)IFN產(chǎn)生的檢測(cè)結(jié)果
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