冠狀病毒(Coronavirus,CoV)屬于套式病毒目(Nidovirales)冠狀病毒科(Coronaviridae)冠狀病毒亞科,可分為α、β、γ、δ四個屬,其中α、β冠狀病毒主要感染哺乳動物,γ-冠狀病毒主要感染鳥類,δ-冠狀病毒既可以感染鳥類,也可以感染哺乳動物。自2003年嚴重急性呼吸綜合征(Severe acute respiratory syndrome,SARS)爆發(fā)以來,對冠狀病毒的研究受到高度重視。近年來,不斷有新的冠狀病毒被發(fā)現(xiàn),如2012年出現(xiàn)的中東呼吸綜合征冠狀病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV),2014年在美國爆發(fā)的豬δ冠狀病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV);而且,隨著環(huán)境條件變化或免疫壓力等因素的影響,一些老的冠狀病毒也發(fā)生了變異,導致新的變異毒株出現(xiàn)和流行,如2010年底在我國大流行的豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)變異毒株。這些新發(fā)與再現(xiàn)的冠狀病毒,給人類和動物健康造成構成了巨大...

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 抗病毒天然免疫概述
        1.1.1 抗病毒天然免疫簡介
        1.1.2 天然免疫的模式識別受體
        1.1.3 RNA病毒誘導I型干擾素產生的信號通路
        1.1.4 I型干擾素誘導的信號轉導
    1.2 病毒蛋白拮抗干擾素應答的機制
        1.2.1 病毒蛋白拮抗I型干擾素表達
        1.2.2 病毒蛋白拮抗I型干擾素信號轉導
    1.3 冠狀病毒的研究進展
        1.3.1 冠狀病毒分類
        1.3.2 冠狀病毒基因組結構和復制
        1.3.3 冠狀病毒與天然免疫
        1.3.4 豬流行性腹瀉病毒的流行特征
        1.3.5 鼠肝炎病毒和呼吸道冠狀病毒的流行特征
        1.3.6 豬δ冠狀病毒的流行特征
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 毒株與菌株
        3.1.2 細胞及轉染相關材料
        3.1.3 載體與質粒
        3.1.4 工具酶、抗體及主要化學試劑
        3.1.5 細胞培養(yǎng)基及其配置
        3.1.6 主要緩沖液及其配置
        3.1.7 主要實驗儀器及設備
        3.1.8 分子生物學分析軟件
    3.2 實驗方法
        3.2.1 表達質粒構建
        3.2.2 VSV-GFP和仙臺病毒的增殖
        3.2.3 RNA的提取及實時熒光定量RT-PCR
        3.2.4 雙熒光素酶檢測實驗
        3.2.5 Western blot及Co-IP實驗
        3.2.6 間接免疫熒光實驗與激光共聚焦顯微鏡觀察
        3.2.7 RNA結合實驗
        3.2.8 統(tǒng)計學方法
第4章 結果與分析
    4.1 PEDV N蛋白拮抗IFN-β產生
        4.1.1 PEDV N蛋白抑制SEV誘導的IFN-β表達
        4.1.2 PEDV N蛋白抑制IRF3的活性
        4.1.3 TBK1可能是PEDV N蛋白潛在的靶標
        4.1.4 PEDV N蛋白能與TBK1發(fā)生相互作用
        4.1.5 PEDV N蛋白阻礙了IRF3與TBK1之間的相互作用
    4.2 MHV和SARS-CoV N蛋白拮抗IFN-β產生
        4.2.1 MHV和SARS-CoV N蛋白沒有靶向TBK1
        4.2.2 MHV N蛋白抑制SEV誘導的IFN-β表達
        4.2.3 MHV和SARS-CoV N蛋白抑制PACT激活的RIG-I/MDA5誘導IFN-β產生活性
        4.2.4 MHV和SARS-CoV N蛋白能與PACT發(fā)生相互作用
        4.2.5 MHV和SARS-CoV N蛋白抑制PACT結合RIG-I/MDA5
        4.2.6 MHV和SARS-CoV N蛋白結合PACT是依賴RNA的
        4.2.7 PEDV和PRRSV N蛋白不能拮抗PACT
    4.3 PDCoV N蛋白抑制IFN-β產生的分子機制
        4.3.1 PDCoV N蛋白抑制SEV誘導的IFN-β產生
        4.3.2 PDCoV N蛋白抑制IRF3活性
        4.3.3 PDCoV N蛋白抑制SEV誘導的RIG-I/MDA5活性
        4.3.4 PDCoV N蛋白能夠與RIG-I發(fā)生相互作用且不依賴RNA
        4.3.5 PDCoV N蛋白能與RIG-I的Hel和CTD結構域發(fā)生相互作用
        4.3.6 PDCoV N蛋白抑制poly(I:C)和PACT結合RIG-I
        4.3.7 PDCoV N蛋白的NTD結構域發(fā)揮抑制IFN-β功能
第5章 討論與結論
    5.1 討論
        5.1.1 PEDV N蛋白抑制IFN-β產生產生的分子機制初步研究
        5.1.2 MHV和SARS-CoV N蛋白抑制IFN-β產生的分子機制初步研究
        5.1.3 PDCoV N蛋白抑制IFN-β產生的分子機制研究
        5.1.4 冠狀病毒編碼的蛋白抑制IFN-β產生的規(guī)律
    5.2 結論
參考文獻
致謝
附錄



本文編號：3777624