傳染性法氏囊病(infectious bursal disease, IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)引起的雛雞的一種急性、高度接觸性、致死性傳染病。該病的病原IBDV主要侵害雞的中樞免疫器官法氏囊,造成其免疫抑制。IBDV屬于雙RNA病毒科,禽雙RNA病毒屬。IBDV基因組由A、B兩段雙鏈RNA分子組成,A節(jié)段全長約為3200bp,B節(jié)段全長約為2800bp。VP2和VP3是IBDV的結(jié)構(gòu)蛋白,占病毒蛋白總量的90%以上。VP2是病毒衣殼的唯一組分,是病毒的主要宿主保護(hù)性抗原,是病毒細(xì)胞嗜性、毒力的重要分子基礎(chǔ)。VP3也是IBDV的重要結(jié)構(gòu)蛋白,與VP1、pVP2及病毒RNA均存在相互作用,它是病毒核糖核蛋白復(fù)合物(RNP)的成分,在病毒的組裝過程中起腳手架作用。傳染病的發(fā)生是病原和宿主相互博弈的結(jié)果,從病毒和宿主及其相互作用的角度來研究,可以更加全面的揭示IBDV侵染的分子機(jī)制。有研究發(fā)現(xiàn),一些宿主天然免疫分子、限制因子及其信號(hào)通路在IBDV的侵染過程發(fā)揮重要作用,然而,全面徹底地揭示IBDV與宿主的相互作...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)簽名表
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 IBDV
        1.1.1 IBDV病原學(xué)
        1.1.2 IBDV基因組
    1.2 IBDV基因組的編碼蛋白
    1.3 IBDV與宿主細(xì)胞相互作用研究進(jìn)展
    1.4 蛋白質(zhì)相互作用研究方法
        1.4.1 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)
        1.4.2 GST pull-down實(shí)驗(yàn)
        1.4.3 酵母雙雜交
        1.4.4 蛋白質(zhì)芯片技術(shù)
        1.4.5 噬菌體展示技術(shù)
    1.5 宿主蛋白CK1α
        1.5.1 CK1α的結(jié)構(gòu)與功能
        1.5.2 CK1α與病毒的相互作用研究進(jìn)展
    1.6 核糖體蛋白L4(RPL4)的結(jié)構(gòu)及功能
    1.7 本研究的目的和意義
第二章 IBDV結(jié)構(gòu)蛋白與宿主細(xì)胞相互作用蛋白的篩選
    2.1 材料和方法
        2.1.1 菌株、毒株、質(zhì)粒和細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑、耗材和儀器
        2.1.3 應(yīng)用IP技術(shù)篩選與IBDV VP2相互作用的宿主細(xì)胞蛋白
        2.1.4 IBDV VP3基因的克隆
        2.1.5 應(yīng)用IP技術(shù)篩選與IBDV VP3相互作用的宿主細(xì)胞蛋白
        2.1.6 互作蛋白質(zhì)譜鑒定
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 與IBDV VP2相互作用宿主細(xì)胞蛋白的篩選
        2.2.2 IBDV VP3基因的克隆
        2.2.3 與IBDV VP3相互作用宿主細(xì)胞蛋白的篩選
    2.3 討論
第三章 IBDV VP3蛋白與宿主細(xì)胞蛋白R(shí)PL4相互作用驗(yàn)證
    3.1 材料和方法
        3.1.1 菌株、質(zhì)粒與細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑和儀器
        3.1.3 雞源核糖體蛋白L4基因(RPL4)的擴(kuò)增及克隆
        3.1.4 不同物種RPL4的同源性比較
        3.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
        3.1.6 激光共聚焦
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 雞源RPL4基因的擴(kuò)增、克隆及序列分析
        3.2.2 免疫共沉淀(co-IP)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.3 激光共聚焦實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.3 討論
第四章 IBDV VP2蛋白與宿主蛋白CK1α相互作用驗(yàn)證
    4.1 材料和方法
        4.1.1 菌株、質(zhì)粒與細(xì)胞
        4.1.2 主要試劑、儀器
        4.1.3 雞源CK1α基因的擴(kuò)增及克隆
        4.1.4 不同物種CK1α的同源性比較
        4.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
        4.1.6 激光共聚焦
        4.1.7 CK1α與VP2相互作用區(qū)域的確定
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 雞源CK1α基因的擴(kuò)增、克隆及序列分析
        4.2.2 免疫共沉淀(co-IP)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.3 激光共聚焦實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.3 討論
第五章 CK1α對(duì)傳染性法氏囊病病毒復(fù)制影響的初步研究
    5.1 材料和方法
        5.1.1 病毒、細(xì)胞
        5.1.2 主要試劑、儀器
        5.1.3 D4476對(duì)DF1細(xì)胞活性的影響
        5.1.4 CK1α功能抑制對(duì)IBDV的影響
    5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.2.1 D4476對(duì)DF1細(xì)胞活性的影響
        5.2.2 CK1α功能抑制后細(xì)胞中病毒蛋白含量上調(diào)
    5.3 討論
第六章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3777269