為了進(jìn)一步揭示戊型肝炎病毒(HEV)的致病機制,本研究利用已建立的沙鼠感染豬源HEV模型,通過real-time qPCR、組織病理學(xué)、超微病理學(xué)、免疫組織化學(xué)、免疫電鏡、western-blotting、 ELISA等方法,對HEV感染沙鼠后,在血液、糞便及全身各組織中HEV病毒載量及其抗原的分布規(guī)律進(jìn)行了觀察研究。對豬源HEV對沙鼠肝臟及肝細(xì)胞內(nèi)線粒體的結(jié)構(gòu)和功能造成的影響進(jìn)行深入研究。重點對線粒體結(jié)構(gòu)、功能和凋亡通路的相關(guān)蛋白及引起細(xì)胞焦亡的關(guān)鍵蛋白進(jìn)行了定位和定量研究。研究結(jié)果如下： 1.在沙鼠感染HEV后,對血液、糞便及全身各組織器官中HEVRNA進(jìn)行real-time qPCR檢測的結(jié)果顯示,在各感染階段HEV RNA在沙鼠血液、糞便及全身各組織都有不同水平復(fù)制和增殖,其中肝和腸道為HEV RNA復(fù)制和增殖最活躍的組織,且在腸道內(nèi)HEV檢測陽性持續(xù)時間最長、HEV RNA拷貝數(shù)最高。對HEV抗原動態(tài)監(jiān)測顯示,HEV抗原在全身各組織內(nèi)均有不同水平的表達(dá)。其中HEV抗原在肝、脾、腸道內(nèi)表達(dá)的時間最長,HEV-ORF2在肝臟內(nèi)感染后28d表達(dá)量最高,在腸道內(nèi)感染后21d表達(dá)量最高...

【文章頁數(shù)】：131 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞一覽表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 戊型肝炎病毒病原學(xué)
        1.1 分類學(xué)
        1.2 分子形態(tài)學(xué)及理化特征
        1.3 病毒基因組及病毒蛋白
        1.4 病毒晶體結(jié)構(gòu)
    2 HEV的流行病學(xué)
        2.1 HEV的地理分布
        2.2 人HEV的流行
        2.3 豬HEV的流行
        2.4 兔HEV的流行
        2.5 禽HEV的流行
        2.6 其他動物HEV的流行
    3 HEV傳播途徑
        3.1 糞口途徑
        3.2 血液傳播
        3.3 接觸感染動物傳播
        3.4 垂直傳播
    4 戊型肝炎臨床癥狀
    5 HEV的動物模型
        5.1 非人靈長類動物模型
        5.2 豬動物模型
        5.3 鼠動物模型
        5.4 兔動物模型
        5.5 雞動物模型
    6 線粒體研究進(jìn)展
        6.1 線粒體的結(jié)構(gòu)
        6.2 線粒體的功能
        6.3 線粒體基因組
        6.4 線粒體凋亡
    7 細(xì)胞焦亡
        7.1 細(xì)胞焦亡的發(fā)現(xiàn)
        7.2 細(xì)胞焦亡的形態(tài)學(xué)變化
        7.3 細(xì)胞焦亡的機制
        7.4 細(xì)胞焦亡炎癥相關(guān)因子
        7.5 細(xì)胞焦亡的影響
    8 本研究的目的與意義
第二章 豬源HEV RNA及抗原在長爪沙鼠組織器官中的分布
    試驗一 豬源HEV毒株分離鑒定
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 豬肝臟內(nèi)HEV PCR檢測結(jié)果
            2.2 豬肝臟組織病理學(xué)觀察
            2.3 豬肝臟內(nèi)HEV ORF2抗原檢測
        3 討論
    試驗二 豬源HEV感染長爪沙鼠組織器官中HEV病毒載量檢測
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 病毒懸液HEV RNA巢式PCR檢測結(jié)果
            2.2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備與鑒定
            2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
            2.4 接種沙鼠病毒液中HEV載量測定
            2.5 沙鼠接種HEV后血清中HEV RNA陽性沙鼠數(shù)量
            2.6 沙鼠接種HEV后糞便中HEV RNA陽性沙鼠數(shù)量
            2.7 沙鼠接種HEV后各組織器官中HEV RNA陽性沙鼠數(shù)量
            2.8 沙鼠接種HEV后血清、糞便、各組織器官中HEV載量
            2.9 沙鼠血清HEV IgG檢測結(jié)果
        3 討論
    試驗三 Western-blotting檢測HEV ORF3抗原在沙鼠組織器官中的定量分布
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
        3 討論
    試驗四 HEV ORF2及ORF3抗原在沙鼠肝臟和腸道內(nèi)免疫組織化學(xué)定位
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 HEV ORF2抗原在沙鼠肝臟內(nèi)的定位
            2.2 HEV ORF3抗原在沙鼠肝臟內(nèi)的定位
            2.3 HEV ORF2抗原在沙鼠腸道內(nèi)的定位
            2.4 HEV ORF3抗原在沙鼠腸道內(nèi)的定位
        3 討論
    試驗五 豬源HEV ORF3抗原在長爪沙鼠肝細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的定位
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        小結(jié)
第三章 HEV感染對沙鼠肝臟功能及結(jié)構(gòu)的影響
    前言
    試驗一 HEV感染對沙鼠肝臟功能的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
            2.1 HEV感染對ALT濃度的影響
            2.2 HEV感染對AST濃度的影響
            2.3 HEV感染對T-BIL濃度的影響
            2.4 HEV感染對I-BIL濃度的影響
            2.5 HEV感染對D-BIL濃度的影響
        3 討論
    試驗二 HEV感染對沙鼠肝細(xì)胞抗氧化能力的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 SOD活性檢測結(jié)果
            2.2 MDA含量檢測結(jié)果
        3 討論
    試驗三 HEV感染對沙鼠肝臟結(jié)構(gòu)的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 沙鼠肝臟器官指數(shù)
            2.2 沙鼠肝臟病理組織學(xué)變化
        3 討論
    試驗四 HEV感染對沙鼠肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察
            2.2 肝細(xì)胞線粒體橫縱徑長度統(tǒng)計
        3 討論
        小結(jié)
第四章 HEV感染對沙鼠肝細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)和功能的影響
    前言
    試驗一 HEV感染對沙鼠肝細(xì)胞線粒體ATP合成與利用的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 ATP合成酶在肝臟中定位分析及陽性面密度統(tǒng)計
            2.2 ATP合成酶在肝臟中半定量分析
            2.3 肝臟中ATP酶含量分析
        3 討論
    試驗二 HEV感染對沙鼠肝細(xì)胞線粒體電子傳遞功能的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 NOX4在肝臟中定位分析及陽性面密度統(tǒng)計
            2.2 NOX4在肝臟中定量分析
            2.3 CytC在肝臟中定位分析及陽性面密度統(tǒng)計
            2.4 CytC在肝臟中定量分析
        3 討論
    試驗三 HEV感染對沙鼠肝細(xì)胞線粒體相關(guān)基因核酸序列的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 沙鼠肝臟線粒體CytB基因擴增結(jié)果
            2.2 沙鼠肝臟線粒體D-loop基因擴增結(jié)果
            2.3 沙鼠肝臟線粒體CytC基因擴增結(jié)果
        3 討論
        小結(jié)
第五章 HEV感染對沙鼠肝細(xì)胞線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白的影響
    前言
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 TUNEL染色結(jié)果
        2.2 線粒體及細(xì)胞漿內(nèi)CytC蛋白定量分析
        2.3 感染沙鼠肝臟內(nèi)Bcl-2和Bax蛋白定位分析
        2.4 感染沙鼠肝臟內(nèi)Bcl-2和Bax蛋白定量分析
        2.5 感染沙鼠肝臟內(nèi)Apaf-1蛋白定位分析
        2.6 感染沙鼠肝臟內(nèi)Apaf-1蛋白定量分析
        2.7 感染沙鼠肝臟內(nèi)Caspase3蛋白定位分析
        2.8 感染沙鼠肝臟內(nèi)Caspase3蛋白定量分析
        2.9 感染沙鼠肝臟內(nèi)Caspase9蛋白定位分析
        2.10 感染沙鼠肝臟內(nèi)Caspase9蛋白定量分析
    3 討論
    小結(jié)
第六章 HEV感染對沙鼠肝細(xì)胞焦亡及炎癥相關(guān)因子的影響
    前言
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 沙鼠肝臟中Caspase1蛋白定位分析
        2.2 沙鼠肝臟中Caspase1蛋白定量分析
        2.3 沙鼠肝臟中IL-1β蛋白定位分析
        2.4 沙鼠肝臟中IL-1β蛋白定量分析
        2.5 沙鼠肝臟中IL-18蛋白定位分析
        2.6 沙鼠肝臟中IL-18蛋白定量分析
        2.7 沙鼠肝臟中TNF-α蛋白定位分析
        2.8 沙鼠肝臟中TNF-α蛋白定量分析
        2.9 沙鼠肝臟中INFγ含量檢測結(jié)果
    3 討論
    小結(jié)
結(jié)論
本研究創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
圖版與說明
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3776094