咖啡酸(caffeicacid,CA)在藥用植物(菊科、薔薇科、無(wú)患子科等)中含量豐富,是一類天然的酚類化合物,具有抗炎、抗氧化作用。奶牛乳腺上皮細(xì)胞(bovine marmmary epithelial cells,bMEC)是乳汁合成、分泌的重要功能單位,是乳腺生長(zhǎng)發(fā)育及泌乳功能調(diào)控機(jī)制研究的主要細(xì)胞模型,在奶牛乳房炎過(guò)程中易受損害。前期研究表明CA可以抑制脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)引起的bMEC結(jié)構(gòu)損傷。巨噬細(xì)胞參與機(jī)體內(nèi)非特異性與特異性免疫,乳房炎發(fā)生時(shí),在遞呈抗原與趨化中性粒細(xì)胞時(shí),啟動(dòng)炎癥反應(yīng)。本研究在前期建立的LPS誘導(dǎo)bMEC結(jié)構(gòu)損傷模型的基礎(chǔ)上,給予Nox(non-phagocyticcelloxidase)抑制劑(DPI)、ROS清除劑(NAC)處理來(lái)探討Nox-ROS信號(hào)在LPS誘導(dǎo)bMEC損傷和小鼠巨噬細(xì)胞系(RAW 264.7)炎癥、氧化應(yīng)激反應(yīng)中的作用,及CA對(duì)該信號(hào)的調(diào)節(jié)機(jī)制。本研究將bMEC、RAW 264.7分別分為空白對(duì)照組(Con)、模型組(Mod)、ROS 清除劑組(NAC+LPS)、Nox 抑制劑(DPI+LPS)...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
Abstract
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第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 奶牛乳房炎的危害
    2 奶牛乳房炎的病因
        2.1 自身與環(huán)境因素
        2.2 熱應(yīng)激和冷應(yīng)激
        2.3 病原微生物
    3 奶牛乳腺的免疫防御機(jī)制
        3.1 乳頭導(dǎo)管的機(jī)械屏障
        3.2 巨噬細(xì)胞與嗜中性粒細(xì)胞
        3.3 淋巴細(xì)胞與樹(shù)突狀細(xì)胞
        3.4 乳腺上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞
        3.5 體液免疫
            3.5.1 乳鐵蛋白與補(bǔ)體
            3.5.2 溶菌酶與細(xì)胞因子
    4 奶牛乳房炎的防治
        4.1 抗生素療法
        4.2 中草藥防治奶牛乳房炎
        4.3 中西醫(yī)結(jié)合防治奶牛乳房炎
    5 咖啡酸的抗炎抗氧化作用
    6 脂多糖的危害
第二章 原代奶牛乳腺上皮細(xì)胞的制備
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)器材
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            1.4.1 乳腺組織分離
            1.4.2 bMEC生長(zhǎng)及純化過(guò)程
            1.4.3 bMEC生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
            1.4.4 bMEC角蛋白的鑒定
            1.4.5 bMEC凍存、復(fù)蘇與傳代培養(yǎng)
        1.5 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 一步膠原酶消化法培養(yǎng)上皮細(xì)胞各個(gè)時(shí)期的生長(zhǎng)情況
        2.2 細(xì)胞角蛋白18鑒定的結(jié)果
        2.3 bMEC生長(zhǎng)曲線
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 CA對(duì)LPS激活的bMEC Nox-ROS信號(hào)的影響
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 bMEC的傳代培養(yǎng)
            1.3.2 細(xì)胞內(nèi)ROS含量的檢測(cè)
            1.3.3 細(xì)胞線粒體膜電位的檢測(cè)
            1.3.4 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
            1.3.5 NF-κB、Nrf2信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的檢測(cè)
            1.3.6 p65與Nrf2核移位的檢測(cè)
            1.3.7 細(xì)胞炎性因子表達(dá)的檢測(cè)
            1.3.8 細(xì)胞MDA含量和SOD活性的檢測(cè)
        1.4 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的bMEC ROS含量的影響
        2.2 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體膜電位的保護(hù)作用
            2.2.1 LPS作用不同時(shí)間對(duì)細(xì)胞線粒體膜電位的影響
            2.2.2 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)bMEC 12 h線粒體膜電位的影響
        2.3 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的bMEC凋亡的影響
        2.4 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的bMEC NF-κB、Nrf2信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白的影響
        2.5 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的bMEC p65和Nrf2核移位的影響
        2.6 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的bMEC炎性因子表達(dá)的影響
        2.7 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的bMEC MDA含量和SOD活性的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 CA對(duì)LPS激活的RAW 264.7 Nox-ROS信號(hào)的影響
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.2.1 主要試劑
            1.2.2 主要試劑配置
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 RAW 264.7復(fù)蘇、凍存與傳代
            1.3.2 細(xì)胞內(nèi)ROS含量的檢測(cè)
            1.3.3 細(xì)胞線粒體膜電位的檢測(cè)
            1.3.4 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
            1.3.5 NF-κB和Nrf2關(guān)鍵蛋白的檢測(cè)
            1.3.6 p65和Nrf2核移位的檢測(cè)
            1.3.7 炎性因子表達(dá)的檢測(cè)
            1.3.8 細(xì)胞MDA含量和SOD活性的檢測(cè)
        1.4 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7的ROS含量的影響
        2.2 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體膜電位的影響
            2.2.1 LPS作用RAW 264.7不同時(shí)間線粒體膜電位的影響
            2.2.2 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7 12 h線粒體膜電位的影
        2.3 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7 12 h凋亡的影響
        2.4 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7 NF-κB、Nrf2信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白的影響
        2.5 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7 p65和Nrf2核移位的影響
        2.6 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7炎性因子表達(dá)的影響
        2.7 CA對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 MDA含量和SOD活性的作用
    3 討論
    4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3774235