發(fā)布時間：2023-03-29 18:15

　　咖啡酸(caffeicacid,CA)在藥用植物(菊科、薔薇科、無患子科等)中含量豐富,是一類天然的酚類化合物,具有抗炎、抗氧化作用。奶牛乳腺上皮細胞(bovine marmmary epithelial cells,bMEC)是乳汁合成、分泌的重要功能單位,是乳腺生長發(fā)育及泌乳功能調控機制研究的主要細胞模型,在奶牛乳房炎過程中易受損害。前期研究表明CA可以抑制脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)引起的bMEC結構損傷。巨噬細胞參與機體內非特異性與特異性免疫,乳房炎發(fā)生時,在遞呈抗原與趨化中性粒細胞時,啟動炎癥反應。本研究在前期建立的LPS誘導bMEC結構損傷模型的基礎上,給予Nox(non-phagocyticcelloxidase)抑制劑(DPI)、ROS清除劑(NAC)處理來探討Nox-ROS信號在LPS誘導bMEC損傷和小鼠巨噬細胞系(RAW 264.7)炎癥、氧化應激反應中的作用,及CA對該信號的調節(jié)機制。本研究將bMEC、RAW 264.7分別分為空白對照組(Con)、模型組(Mod)、ROS 清除劑組(NAC+LPS)、Nox 抑制劑(DPI+LPS)...

【文章頁數】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1 奶牛乳房炎的危害
    2 奶牛乳房炎的病因
        2.1 自身與環(huán)境因素
        2.2 熱應激和冷應激
        2.3 病原微生物
    3 奶牛乳腺的免疫防御機制
        3.1 乳頭導管的機械屏障
        3.2 巨噬細胞與嗜中性粒細胞
        3.3 淋巴細胞與樹突狀細胞
        3.4 乳腺上皮細胞與成纖維細胞
        3.5 體液免疫
            3.5.1 乳鐵蛋白與補體
            3.5.2 溶菌酶與細胞因子
    4 奶牛乳房炎的防治
        4.1 抗生素療法
        4.2 中草藥防治奶牛乳房炎
        4.3 中西醫(yī)結合防治奶牛乳房炎
    5 咖啡酸的抗炎抗氧化作用
    6 脂多糖的危害
第二章 原代奶牛乳腺上皮細胞的制備
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要實驗器材
        1.3 主要實驗試劑
        1.4 實驗方法
            1.4.1 乳腺組織分離
            1.4.2 bMEC生長及純化過程
            1.4.3 bMEC生長曲線的測定
            1.4.4 bMEC角蛋白的鑒定
            1.4.5 bMEC凍存、復蘇與傳代培養(yǎng)
        1.5 數據分析
    2 結果
        2.1 一步膠原酶消化法培養(yǎng)上皮細胞各個時期的生長情況
        2.2 細胞角蛋白18鑒定的結果
        2.3 bMEC生長曲線
    3 討論
    4 小結
第三章 CA對LPS激活的bMEC Nox-ROS信號的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗方法
            1.3.1 bMEC的傳代培養(yǎng)
            1.3.2 細胞內ROS含量的檢測
            1.3.3 細胞線粒體膜電位的檢測
            1.3.4 細胞凋亡的檢測
            1.3.5 NF-κB、Nrf2信號通路關鍵蛋白的檢測
            1.3.6 p65與Nrf2核移位的檢測
            1.3.7 細胞炎性因子表達的檢測
            1.3.8 細胞MDA含量和SOD活性的檢測
        1.4 數據分析
    2 結果
        2.1 CA對LPS誘導的bMEC ROS含量的影響
        2.2 CA對LPS誘導的細胞線粒體膜電位的保護作用
            2.2.1 LPS作用不同時間對細胞線粒體膜電位的影響
            2.2.2 CA對LPS誘導bMEC 12 h線粒體膜電位的影響
        2.3 CA對LPS誘導的bMEC凋亡的影響
        2.4 CA對LPS誘導的bMEC NF-κB、Nrf2信號通路中關鍵蛋白的影響
        2.5 CA對LPS誘導的bMEC p65和Nrf2核移位的影響
        2.6 CA對LPS誘導的bMEC炎性因子表達的影響
        2.7 CA對LPS誘導的bMEC MDA含量和SOD活性的影響
    3 討論
    4 小結
第四章 CA對LPS激活的RAW 264.7 Nox-ROS信號的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
            1.2.1 主要試劑
            1.2.2 主要試劑配置
        1.3 實驗方法
            1.3.1 RAW 264.7復蘇、凍存與傳代
            1.3.2 細胞內ROS含量的檢測
            1.3.3 細胞線粒體膜電位的檢測
            1.3.4 細胞凋亡的檢測
            1.3.5 NF-κB和Nrf2關鍵蛋白的檢測
            1.3.6 p65和Nrf2核移位的檢測
            1.3.7 炎性因子表達的檢測
            1.3.8 細胞MDA含量和SOD活性的檢測
        1.4 數據分析
    2 結果
        2.1 CA對LPS誘導的RAW 264.7的ROS含量的影響
        2.2 CA對LPS誘導的細胞線粒體膜電位的影響
            2.2.1 LPS作用RAW 264.7不同時間線粒體膜電位的影響
            2.2.2 CA對LPS誘導的RAW 264.7 12 h線粒體膜電位的影
        2.3 CA對LPS誘導的RAW 264.7 12 h凋亡的影響
        2.4 CA對LPS誘導的RAW 264.7 NF-κB、Nrf2信號通路中關鍵蛋白的影響
        2.5 CA對LPS誘導的RAW 264.7 p65和Nrf2核移位的影響
        2.6 CA對LPS誘導的RAW 264.7炎性因子表達的影響
        2.7 CA對LPS誘導的RAW264.7 MDA含量和SOD活性的作用
    3 討論
    4 小結
結論
參考文獻
致謝



本文編號：3774235