發(fā)布時(shí)間：2023-03-28 23:38

　　豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一種能引起哺乳仔豬嚴(yán)重腹瀉甚至死亡的高度接觸性腸道冠狀病毒,對(duì)當(dāng)前新生仔豬健康造成了嚴(yán)重的威脅。PEDV主要通過(guò)靶向入侵豬腸道中腸絨毛上皮細(xì)胞,破壞其粘膜免疫系統(tǒng)屏障而引起仔豬發(fā)病。分泌型免疫球蛋白(sIgs)介導(dǎo)的粘膜免疫應(yīng)答在控制PEDV感染過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用,而sIgs的分泌主要取決于多聚免疫球蛋白受體(p IgR),因此,探究pIgR在病毒感染復(fù)制過(guò)程中的作用,對(duì)解析PEDV的致病機(jī)理具有重要價(jià)值。sIgs主要依賴(lài)p IgR分泌至腸腔以抵御腸道病原微生物的入侵。為了解p IgR在PEDV感染后的表達(dá)情況,我們?cè)谇捌赑EDV FJzz1株感染試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選取PEDV感染組與正常對(duì)照組試驗(yàn)仔豬的不同腸段,檢測(cè)各腸段中p IgR的mRNA變化情況。結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,PEDV感染組仔豬不同腸段內(nèi)pIgR的mRNA水平均顯著增加,表明PEDV感染后顯著上調(diào)宿主體內(nèi)p IgR的轉(zhuǎn)錄。在體外,我們將PEDV FJzz1株感染宿主細(xì)胞LLC-PK1分析了pIg R表達(dá)變化。結(jié)果顯示,F...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 豬流行性腹瀉簡(jiǎn)介
        1.1.1 豬流行性腹瀉病毒基因組及病毒結(jié)構(gòu)
        1.1.2 豬流行性腹瀉病毒侵染細(xì)胞的過(guò)程
        1.1.3 PEDV與粘膜免疫
    1.2 多聚免疫球蛋白受體
        1.2.1 pIgR基本結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.2 pIgR表達(dá)的調(diào)節(jié)通路
        1.2.3 pIgR在病原感染中的作用
    1.3 研究目的與意義
第二章 pIgR對(duì) PEDV體外增殖的影響
    2.1 材料
        2.1.1 病毒、抗體、細(xì)胞、質(zhì)粒和菌株
        2.1.2 感染仔豬小腸組織和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要試劑
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 病毒感染與組織處理
        2.2.2 總RNA的提取
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 相對(duì)熒光定量PCR檢測(cè)
        2.2.5 pIgR表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.6 SDS-PAGE電泳及Western blot
        2.2.7 pIgR多抗的制備與鑒定
        2.2.8 過(guò)表達(dá)pIgR對(duì) PEDV增殖的影響
        2.2.9 敲低內(nèi)源性pIgR對(duì) PEDV增殖的影響
        2.2.10 pIgR缺失細(xì)胞系的構(gòu)建
        2.2.11 缺失pIgR對(duì)PEDV增殖的影響
        2.2.12 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 豬源pIgR基因的擴(kuò)增
        2.3.2 pIgR基因的序列分析
        2.3.3 pIgR編碼蛋白的抗原性分析
        2.3.4 pIgR的原核表達(dá)、純化與pIgR多克隆抗體的制備
        2.3.5 p3×FLAG-pIgR真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)鑒定
        2.3.6 pIgR多抗的IFA鑒定
        2.3.7 pIgR多抗的Western Blot鑒定
        2.3.8 pIgR在 PEDV感染仔豬腸組織中的表達(dá)變化
        2.3.9 PEDV感染宿主細(xì)胞pIgR表達(dá)變化
        2.3.10 PEDV感染Vero細(xì)胞pIgR表達(dá)變化
        2.3.11 過(guò)量表達(dá)pIgR可促進(jìn)PEDV增殖
        2.3.12 敲低內(nèi)源性pIgR抑制PEDV的增殖
        2.3.13 pIgR缺失細(xì)胞系的構(gòu)建
        2.3.14 缺失內(nèi)源性pIgR抑制PEDV的增殖
    2.4 討論
第三章 PEDV調(diào)控pIgR表達(dá)的分子途徑初步研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒與細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 引物設(shè)計(jì)
        3.1.5 熒光定量PCR檢測(cè)
        3.1.6 Western blot分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 PEDV感染后參與調(diào)控pIgR表達(dá)相關(guān)分子轉(zhuǎn)錄水平變化
        3.2.2 TNF-α呈劑量依賴(lài)性促進(jìn)pIgR表達(dá)
        3.2.3 PEDV對(duì) NF-κB途徑的影響
        3.2.4 泛素蛋白酶體抑制劑MG132 處理對(duì)pIgR表達(dá)的影響
    3.3 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3773524