鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer)是一種重要的細菌性致病菌,可引起雛鴨感染發(fā)病或死亡。已報道的鴨疫里默氏桿菌血清型有21種,其中血清1、2、10型是國內優(yōu)勢血清型。外膜蛋白A(OmpA)是鴨疫里默氏桿菌的重要免疫原性蛋白,在不同血清型中保守性良好。為制備鴨疫里默氏桿菌的免疫膠體金檢測試紙條,本研究選用OmpA蛋白作為抗原免疫BALB/c小鼠制備單克隆抗體。將免疫小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0融合后,用間接ELISA方法篩選陽性雜交瘤細胞株,經腹腔注射BALB/c小鼠制備單克隆抗體。通過單克隆抗體效價及穩(wěn)定性測定,秋水仙素法進行雜交瘤細胞的染色體分析以及Western blot法鑒定單克隆抗體特異性,共獲得3株穩(wěn)定分泌抗鴨疫里默氏桿菌OmpA的單克隆抗體,分別命名為2D5、2A6、4H8。3株單克隆抗體亞型均鑒定為IgG2a,腹水效價均測定為1:2048000;3株單克隆抗體均與鴨疫里默氏桿菌血清1型RA-CH3株、血清2型RA-NJ3株和血清10型RA-HXb2株發(fā)生特異性反應,與大腸桿菌、沙門菌和多殺性巴氏桿菌等其他禽致病菌不發(fā)生交叉反應,表明本研究...

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 鴨疫里默氏桿菌及其流行病學
        1.1.1 鴨疫里默氏桿菌概述
        1.1.2 流行病學
        1.1.3 鴨疫里默氏桿菌的毒力因子
    1.2 鴨疫里默氏桿菌檢測技術的研究
        1.2.1 血清學診斷方法
        1.2.2 分子生物學檢測技術
    1.3 免疫膠體金快速檢測技術的概述
        1.3.1 膠體金的概述
        1.3.2 免疫膠體金的概述
        1.3.3 免疫膠體金檢測技術
        1.3.4 膠體金免疫層析法
        1.3.5 膠體金免疫層析技術的應用
    1.4 目的和意義
第二章 鴨疫里默氏桿菌單克隆抗體的制備
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、實驗動物及細胞系
        2.1.2 主要儀器設備及試劑
        2.1.3 所需溶液配制
        2.1.4 實驗引物設計
    2.2 方法
        2.2.1 小鼠免疫
        2.2.2 骨髓瘤細胞準備
        2.2.3 脾淋巴細胞的準備
        2.2.4 飼養(yǎng)細胞的制備
        2.2.5 細胞融合
        2.2.6 雜交瘤細胞的篩選及亞克隆
        2.2.7 雜交瘤細胞株的亞型鑒定
        2.2.8 鴨疫里默氏桿菌OmpA單克隆抗體腹水的制備
        2.2.9 鴨疫里默氏桿菌OmpA單克隆抗體的鑒定
        2.2.10 鴨疫里默氏桿菌單克隆抗體腹水的純化
    2.3 結果
        2.3.1 鴨疫里默氏桿菌單克隆抗體的制備及鑒定
        2.3.2 鴨疫里默氏桿菌單克隆抗體亞型鑒定
        2.3.3 鴨疫里默氏桿菌單克隆抗體腹水效價
        2.3.4 鴨疫里默氏桿菌單克隆抗體的染色體分析
        2.3.5 鴨疫里默氏桿菌單克隆抗體特異性
        2.3.6 鴨疫里默氏桿菌單克隆抗體的純化
    2.4 討論
    小結
第三章 鴨疫里默氏桿菌免疫膠體金檢測試紙條的研制
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 主要儀器與試劑
        3.1.3 培養(yǎng)基與緩沖液配制
    3.2 方法
        3.2.1 金溶液的制備及鑒定
        3.2.2 膠體金標記蛋白的標記條件摸索及鑒定
        3.2.3 反應體系的組合篩選
        3.2.4 免疫膠體金試紙條組裝及反應條件優(yōu)化
        3.2.5 免疫膠體金試紙條的性狀評價
    3.3 結果
        3.3.1 金溶液的制備及鑒定
        3.3.2 膠體金標記蛋白的標記條件摸索及鑒定
        3.3.3 反應條件的優(yōu)化
        3.3.4 免疫膠體金試紙條的性狀評價
    3.4 討論
    小結
第四章 鴨疫里默氏桿菌免疫膠體金檢測試劑條的臨床應用
    4.1 材料
        4.1.1 菌株及實驗動物
        4.1.2 主要儀器及材料
    4.2 方法
        4.2.1 實驗感染鴨的樣品檢測
        4.2.2 臨床動物樣品檢測
    4.3 結果
        4.3.1 實驗感染鴨的樣品檢測
        4.3.2 臨床樣品檢測
    4.4 討論
    小結
第五章 全文總結
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3772178