巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)是動(dòng)物界發(fā)現(xiàn)較早且最為保守的細(xì)胞因子之一,具有調(diào)節(jié)免疫機(jī)能,參與炎癥反應(yīng),參與物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)等功能。MIF具有“多效(pleiotropic)性”,能通過多種機(jī)制介導(dǎo)先天性和獲得性免疫,誘導(dǎo)細(xì)胞因子、趨化因子(chemokines)和粘附因子的分泌及聚集,或者與糖皮質(zhì)激素和下丘腦-垂體-腎上腺皮軸相互作用,影響細(xì)胞增殖、凋亡和吞噬作用,激活基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)系統(tǒng),從而在膿毒血癥、感染和炎癥性疾病、自身免疫性疾病、移植排斥、動(dòng)脈硬化、癌癥等多種疾病中扮演重要角色。對于MIF的研究主要集中在人及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上,關(guān)于家禽家畜MIF的研究涉及較少。本課題旨在獲得雞重組MIF,并制備抗雞MIF抗體。 首先將構(gòu)建并鑒定的原核表達(dá)載體pEASY-E1-MIF轉(zhuǎn)入表達(dá)感受態(tài)BL21(DE3),得到轉(zhuǎn)化子；其次對IPTG誘導(dǎo)表達(dá)進(jìn)行優(yōu)化；再利用Ni-NTA柱進(jìn)行純化；最后,用純化的雞MIF蛋白免疫家兔,獲得抗雞MIF血清,利用免疫印跡法對自...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
前言
文獻(xiàn)綜述
    1 MIF的簡介
    2 MIF的來源、結(jié)構(gòu)及多態(tài)性
        2.1 MIF的來源
        2.2 MIF的結(jié)構(gòu)及多態(tài)性
    3 MIF的生物學(xué)功能
        3.1 MIF對糖皮質(zhì)激素作用
        3.2 MIF是免疫和炎癥性疾病的重要前炎癥細(xì)胞因子
        3.3 在T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性疾病中的作用
        3.4 在巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的先天免疫反應(yīng)中的作用
        3.5 在基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)介導(dǎo)的組織損傷中的作用
        3.6 調(diào)節(jié)物質(zhì)能量代謝
    4 MIF的分子作用機(jī)制
    5 MIF與各種疾病
        5.1 MIF與心血管系統(tǒng)疾病
        5.2 MIF與皮膚病
        5.3 MIF與腫瘤
    6 結(jié)語
本實(shí)驗(yàn)立項(xiàng)依據(jù)和研究意義
本實(shí)驗(yàn)的基本思路
一、雞MIF蛋白原核表達(dá)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑
            1.1.1 菌株和質(zhì)粒
            1.1.2 主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 緩沖液與常用試劑的配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 質(zhì)粒的鑒定
            2.1.1 質(zhì)粒的提取
            2.1.2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
            2.1.3 測序鑒定
        2.2 重組MIF蛋白的表達(dá)
            2.2.1 重組MIF蛋白的小量表達(dá)
            2.2.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測蛋白表達(dá)情況
            2.2.3 MIF蛋白表達(dá)形式分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 陽性質(zhì)粒酶切與測序鑒定結(jié)果
        3.2 重組MIF蛋白小量表達(dá)結(jié)果
        3.3 MIF蛋白表達(dá)形式
    4 討論
二、雞MIF的純化和初步鑒定
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑
            1.1.1 菌株和質(zhì)粒
            1.1.2 主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 緩沖液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 MIF蛋白大量表達(dá)及純化
        2.2 定量測定純化MIF蛋白
        2.3 表達(dá)產(chǎn)物Western blot鑒定
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 MIF蛋白大量表達(dá)純化結(jié)果
        3.2 純化MIF蛋白的蛋白定量分析
        3.3 表達(dá)產(chǎn)物Western blot鑒定
    4 討論
三、雞MIF多克隆抗體的制備
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 緩沖液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 原核表達(dá)MIF蛋白
        2.2 家兔免疫
        2.3 樣品的采集與檢測
            2.3.1 血清的收集
            2.3.2 抗體效價(jià)的檢測
            2.3.3 Westem Blot檢測
    3 結(jié)果與分析
        3.1 ELISA實(shí)驗(yàn)
        3.2 Western blot鑒定
    4 討論
四、全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
ABSTRACT
致謝



本文編號(hào)：3772141