發(fā)布時(shí)間：2023-03-26 18:57

　　牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus, BVDV)是黃病毒科瘟病毒屬成員,除感染牛外,它還能引起豬、羊、鹿以及多種野生動(dòng)物發(fā)病。近年來,豬群感染BVDV的現(xiàn)象日益嚴(yán)重,而且主要是持續(xù)性感染。如果母畜在孕期前30-120天內(nèi)感染非致細(xì)胞病變型(noncytopathic, NCP) BVDV,此時(shí)胎兒免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全,不能識(shí)別外源NCP型BVDV為抗原,因此容易造成胎兒持續(xù)感染BVDV,成為主要傳染源之一。研究表明只有NCP型BVDV感染才能產(chǎn)生持續(xù)性感染,而病毒逃逸細(xì)胞先天免疫是建立細(xì)胞持續(xù)感染的第一步。因此,了解豬源BVDV逃逸細(xì)胞先天免疫的機(jī)制,有助于我們解釋BVDV持續(xù)性感染的作用機(jī)制,從而制定更全面的BVDV防控措施。 ISG15(interferon-stimylated genel5, ISG15)是泛素樣蛋白(UBL)家族的重要成員,與干擾素有密切關(guān)系,是干擾素誘導(dǎo)表達(dá)最強(qiáng)的ISG之一,也是第一個(gè)被鑒定的ISG。ISG15可抑制多種DNA病毒和RNA病毒的增殖,在抗病毒免疫中具有不容忽視的地位,現(xiàn)已證明ISG15在抗1型HIV病毒、...

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說明
文獻(xiàn)綜述
    一、牛病毒性腹瀉病毒的研究進(jìn)展
        1、牛病毒性腹瀉病毒生物學(xué)特性及分類
        2、牛病毒性腹瀉病毒的致病性
        3、牛病毒性腹瀉病毒的流行現(xiàn)狀
        4、豬源BVDV感染對(duì)豬的影響
        5、豬群中BVDV的鑒定
        6、豬源BVDV在國(guó)內(nèi)的流行傳播
        7、牛病毒性腹瀉病毒的防控
    二、干擾素刺激因子ISG15
        1、ISG15蛋白結(jié)構(gòu)
        2、ISG15的類泛素化修飾系統(tǒng)
        3、ISG15與病毒相互作用
    參考文獻(xiàn)
第一章 ISG15的原核表達(dá)及多抗血清的制備
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 細(xì)胞、菌株和載體
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2. 方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2 氯化鈣法制備DH5α感受態(tài)細(xì)胞
        2.3 堿裂解法小提質(zhì)粒
        2.4 干擾素刺激因子ISG15的克隆
        2.5 重組原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.6 ISG15在pCold-TF載體中的原核表達(dá)
        2.7 ISG15重組蛋白的純化及濃度測(cè)定
        2.8 ISG15重組蛋白多抗血清的制備與鑒定
    3. 結(jié)果
        3.1 ISG15基因的PCR產(chǎn)物
        3.2 重組T載體質(zhì)粒的鑒定
        3.3 原核表達(dá)重組質(zhì)粒的鑒定
        3.4 ISG15重組蛋白的表達(dá)與鑒定
        3.5 ISG15多克隆抗體的鑒定
    4. 討論
    參考文獻(xiàn)
第二章 穩(wěn)定表達(dá)ISG15蛋白的細(xì)胞系的構(gòu)建與鑒定
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 質(zhì)粒、病毒和細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2. 方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2 ISG15基因的PCR擴(kuò)增及克隆
        2.3 ISG15重組真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.4 重組真核表達(dá)質(zhì)粒的提純
        2.5 穩(wěn)定表達(dá)ISG15蛋白細(xì)胞系的構(gòu)建與篩選
        2.6 穩(wěn)定表達(dá)ISG15蛋白細(xì)胞系的鑒定
    3. 結(jié)果
        3.1 ISG15基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
        3.2 重組質(zhì)粒pEASY-ISG15’的鑒定
        3.3 重組真核表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
        3.4 穩(wěn)定表達(dá)ISG15蛋白細(xì)胞系的鑒定
    4. 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 ISG15和豬源BVDV-2相互作用探究
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 病毒和細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2. 方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2 病毒的增殖與培養(yǎng)
        2.3 病毒效價(jià)TCID50的測(cè)定
        2.4 病毒滴度增長(zhǎng)曲線的繪制
        2.5 熒光定量PCR
    3. 結(jié)果
        3.1 ISG15蛋白對(duì)豬源BVDV-2復(fù)制的影響
        3.2 豬源BVDV-2感染對(duì)ISG15基因表達(dá)的影響
        3.3 ISG15蛋白對(duì)豬源BVDV-2誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素表達(dá)的影響
    4. 討論
    參考文獻(xiàn)
全文小結(jié)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
以主要作者參編的著作
致謝



本文編號(hào)：3771520