睪丸發(fā)育和精子發(fā)生在哺乳動物體中是受多基因調(diào)控的復(fù)雜過程;睪丸發(fā)育和精子發(fā)生過程是否正常直接關(guān)系到精液品質(zhì)的好壞,而精液品質(zhì)則直接影響雄性動物的繁殖性能。研究報道促黃體素受體、催乳素受體基因在哺乳動物生殖發(fā)育中扮演重要角色,廣泛存在于各種組織。但現(xiàn)有研究主要集中在雌性動物的卵巢和子宮等生殖器官上,對雄性動物睪丸中表達(dá)的研究少之甚少。而GH和IGF-1基因是動物生長軸上的關(guān)鍵基因,因此,大量研究主要集中在提高動物生長速度和產(chǎn)肉性能上,對繁殖性能的研究相對較少。但LHR、PRLR、GH和IGF-1基因在雄性動物精子發(fā)生和睪丸發(fā)育及其功能維持方面具有重要作用,而在青藏高原特有畜種牦牛睪丸不同發(fā)育階段上的研究仍處于空白階段。因而探究LHR、PRLR、GH和IGF-1基因在牦牛睪丸發(fā)育中的調(diào)控作用,對揭示公牦牛精子發(fā)生和睪丸功能維持的分子調(diào)控機(jī)制具有重大意義。本研究分別采集幼年期(6月齡)、初情期(24月齡)、性成熟期(36月齡)、成年期(72月齡)牦牛睪丸組織和公牦牛腎臟、肝臟、肺臟、心臟、脾臟、骨骼肌、皮下脂肪等器官組織為試驗材料,每個組織分別采集5頭。對LHR、PRLR、GH、IGF-1基...

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【學(xué)位級別】：碩士

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項目基金來源
摘要
Summary
縮略詞中英文對照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 睪丸的組織結(jié)構(gòu)和精子發(fā)生
        1.1 睪丸的組織結(jié)構(gòu)
        1.2 精子發(fā)生過程
    2 相關(guān)基因的國內(nèi)外研究進(jìn)展
        2.1 LHR的結(jié)構(gòu)與研究進(jìn)展
        2.2 PRLR的結(jié)構(gòu)與研究進(jìn)展
        2.3 GH的結(jié)構(gòu)與研究進(jìn)展
        2.4 IGF-1 的結(jié)構(gòu)與研究進(jìn)展
    3 研究的目的與意義
第二章 試驗研究
    試驗一 LHR、PRLR基因在牦牛不同發(fā)育時期睪丸中的表達(dá)與定位
        1 材料與方法
            1.1 試驗動物
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 試驗方法
                1.3.1 組織樣采集
                1.3.2 總RNA的提取
                1.3.3 第一鏈c DNA合成
                1.3.4 引物設(shè)計及合成
                1.3.5 常規(guī)逆轉(zhuǎn)錄PCR(reversetranscriptionpoly-merasechain reaction,RT-PCR)檢測
                1.3.6 實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)
                1.3.7 睪丸組織石蠟切片的制備
                1.3.8 免疫組織化學(xué)染色
                1.3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與結(jié)果分析
            1.4 主要生物學(xué)數(shù)據(jù)庫和生物學(xué)軟件
        2 結(jié)果與分析
            2.1 睪丸和不同器官組織總RNA的提取
            2.2 LHR和 PRLR基因的PCR擴(kuò)增
            2.3 內(nèi)參基因、目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物特異性分析
            2.4 LHR、PRLR基因在牦牛不同發(fā)育時期睪丸組織的差異表達(dá)
            2.5 LHR、PRLR基因在牦牛不同器官中的表達(dá)差異
            2.6 LHR和 PRLR蛋白在不同發(fā)育時期的免疫組化
        3 討論
            3.1 LHR、PRLR基因在不同發(fā)育時期牦牛睪丸組織的表達(dá)差異
            3.2 LHR、PRLR基因在成年期牦牛不同器官組織中的表達(dá)差異
            3.3 LHR、PRLR蛋白在不同發(fā)育期牦牛睪丸組織中的定位
    試驗二 GH、IGF-1 基因在不同發(fā)育時期牦牛睪丸中的表達(dá)與定位
        1 材料與方法
            1.1 試驗動物
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 試驗方法
                1.3.1 組織樣采集
                1.3.2 總RNA的提取
                1.3.3 第一鏈c DNA合成
                1.3.4 引物設(shè)計及合成
                1.3.5 常規(guī)RT-PCR檢測
                1.3.6 半定量PCR
                1.3.7 qRT-PCR
                1.3.8 總蛋白提取與變性
                1.3.9 Western blot
                1.3.10 免疫組織化學(xué)染色
                1.3.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與結(jié)果分析
            1.4 主要生物學(xué)數(shù)據(jù)庫和生物學(xué)軟件
        2 結(jié)果與分析
            2.1 GH、IGF-1 基因的PCR擴(kuò)增
            2.2 GH、IGF-1 基因在牦牛睪丸組織和不同器官組織中半定量PCR分析
            2.3 實時熒光定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物特異性分析
            2.4 GH、IGF-1 基因在牦牛不同發(fā)育時期睪丸組織的差異表達(dá)
            2.5 GH、IGF-1 基因在牦牛不同器官中的表達(dá)差異
            2.6 GH、IGF-1 蛋白在不同發(fā)育階段牦牛睪丸中的表達(dá)
            2.7 GH、IGF-1 蛋白在不同發(fā)育時期牦牛睪丸中的免疫組化
        3 討論
            3.1 GH、IGF-1 基因在不同發(fā)育時期牦牛睪丸組織的表達(dá)差異
            3.2 GH、IGF-1 基因在性成熟期牦牛不同器官組織中的表達(dá)差異
            3.3 GH、IGF-1 蛋白在不同發(fā)育期牦牛睪丸組織中的定位
第三章 結(jié)論
本研究的創(chuàng)新點
本研究的不足之處
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介



本文編號：3770934