牛支原體(Mycoplasma bovis, M. bovis)屬于柔膜體綱,支原體目微生物。能夠引起犢牛肺炎,關(guān)節(jié)炎,乳房炎等多種疾病。自2008年首次從湖北省病牛身上分離到M. bovis以來(lái),全國(guó)多個(gè)省市地區(qū)就不斷有M. bovis病例的報(bào)道,現(xiàn)今牛支原體在我國(guó)已成普遍感染狀態(tài),牛支原體也已經(jīng)成為威脅我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)的重要病原之一。 病原體對(duì)宿主的粘附是病原體感染的第一步,是支原體致病機(jī)理研究的一個(gè)重要方面。近年來(lái),支原體粘附蛋白的研究取得了較大進(jìn)展,但主要集中在引起人類(lèi)傳染病的肺炎支原體和無(wú)乳支原體中。本研究在M. bovis Hubei-1株全基因組測(cè)序的基礎(chǔ)上,根據(jù)生物信息學(xué),選取了一個(gè)690bp的vpmaX基因,重點(diǎn)研究其可能具有的粘附特性。 Hubei-1vpmaX大小為690bp,編碼一個(gè)25kDa的蛋白vpmaX。該蛋白在GeneBank中被命名為"variable surface lipoprotein A",但其與牛支原體標(biāo)準(zhǔn)株P(guān)G45中Vsp (variable surface lipoproteins, Vsp)家族成員的VspA絕然不同。序列分析顯示vpmaX氨...

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 牛支原體(Mycoplasma bovis)概述
        1.1.1 牛支原體(Mycoplasma bovis)簡(jiǎn)介
        1.1.2 牛支原體相關(guān)疾病
        1.1.3 牛支原體感染的診斷
    1.2 牛支原體粘附因子的研究
    1.3 牛支原體表面脂蛋白及Vsp家族蛋白的研究
    1.4 本研究的目的與意義
第二章 vpmaX的序列分析及原核表達(dá)
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、載體
        2.1.2 主要試劑及試劑盒
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要溶液及配置方法
    2.2 方法
        2.2.1 序列分析及比對(duì)
        2.2.2 M.bovis培養(yǎng)及基因組提取
        2.2.3 M.bovis Hubei-1 vpmaX克隆
        2.2.4 pET28a-vpmaX重組質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定
        2.2.5 重組質(zhì)粒pET28a-vpmaX的誘導(dǎo)及表達(dá)
        2.2.6 rvpmaX的純化
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 vpmaX及其基因的生物信息學(xué)分析
        2.3.2 pET28a-vpmaX重組質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定
        2.3.3 rvmaX的表達(dá)與純化
    2.4 小結(jié)
    2.5 討論
第三章 vpmaX的膜定位實(shí)驗(yàn)
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 菌株和血清
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        3.1.4 相關(guān)溶液及配制方法
    3.2 方法
        3.2.1 兔抗rvpmaX抗體的制備
        3.2.2 兔抗vpmaX血清效價(jià)的測(cè)定
        3.2.3 vpmaX在M.bovis上的定位實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 兔抗rvpmaX抗體效價(jià)的測(cè)定
        3.3.2 vpmaX在M.bovis上的定位實(shí)驗(yàn)
    3.4 小結(jié)
    3.5 討論
第四章 vpmaX粘附特性的鑒定
    4.1 材料
        4.1.1 菌株與細(xì)胞
        4.1.2 試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 方法
        4.2.1 rvpmaX粘附EBL細(xì)胞
        4.2.2 夾心ELISA實(shí)驗(yàn)
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 rvpmaX粘附EBL細(xì)胞
        4.3.2 夾心ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.4 小結(jié)
    4.5 討論
第五章 vpmaX抗原變異的研究
    5.1 材料
        5.1.1 菌株
        4.1.2 試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及儀器
    5.2 方法
        5.2.1 M.bovis Hubei-1抗體壓力下的培養(yǎng)
        5.2.2 M.bovis Hubei-1抗體壓力下vpmaX表達(dá)的變化
    5.3 結(jié)果
    5.4 小結(jié)
    5.5 討論
第六章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3770829