H9亞型禽流感(Avian influenza,AI)和雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum,MG)感染是危害養(yǎng)禽業(yè)的重要呼吸道傳染病,雞、鴨、鵝、鴿、鵪鶉等多種禽類(lèi)均可感染。疫苗免疫是防控H9亞型禽流感發(fā)生與流行的主要手段,而雞毒支原體病的防控,只有部分種雞場(chǎng)使用疫苗。因此,血清學(xué)檢測(cè)對(duì)于感染后的快速診斷和疫苗免疫后的抗體水平定量檢測(cè)尤其重要。傳統(tǒng)的血清學(xué)方法,一般需要專(zhuān)業(yè)人員操作,步驟繁瑣,耗時(shí)長(zhǎng)。膠體金檢測(cè)操作簡(jiǎn)單,快速,成本低,無(wú)需專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員和昂貴的設(shè)備,可以在基層廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)室篩選獲得了一株小鼠抗多種禽類(lèi)IgY Fc片段的單抗,該單抗能與雞、鴨、鵝等多種禽類(lèi)血清反應(yīng),為建立一種能檢測(cè)多種禽類(lèi)血清抗體的膠體金試紙條方法奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)結(jié)合免疫定量速測(cè)儀的信號(hào)識(shí)別,建立了定量檢測(cè)方法。本研究分別制備了一種適用于多種禽類(lèi)H9亞型禽流感病毒抗體定量檢測(cè)膠體金試紙條和一種適用于多種禽類(lèi)雞毒支原體抗體檢測(cè)膠體金試紙條,既可定性檢測(cè),用于未免疫禽類(lèi)雞毒支原體感染后的快速診斷;也可定量檢測(cè),用于疫苗免疫后的抗體水平監(jiān)測(cè)。主要研究結(jié)果如下:1.H9亞型禽流感病毒...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)(Abbreviation)
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 前言
    2 低致病性禽流感的研究進(jìn)展
        2.1 低致病性禽流感概述
        2.2 檢測(cè)方法的研究進(jìn)展
            2.2.1 病毒的分離鑒定
            2.2.2 血清學(xué)檢測(cè)方法
            2.2.3 分子生物學(xué)診斷方法
    3 雞毒支原體的研究進(jìn)展
        3.1 雞毒支原體概述
        3.2 雞毒支原體的檢測(cè)方法
            3.2.1 病原的分離鑒定
            3.2.2 血清學(xué)方法
            3.2.3 分子生物學(xué)技術(shù)
    4 膠體金免疫層析技術(shù)的研究進(jìn)展
        4.1 膠體金免疫層析技術(shù)概述
        4.2 膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用
    5 目的意義
第二章 H9亞型禽流感病毒抗體定量檢測(cè)膠體金試紙條的研制與初步應(yīng)用
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗(yàn)材料
            2.1.1 菌株、質(zhì)粒、細(xì)胞與試驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 試驗(yàn)儀器
            2.1.3 主要試劑的配制
        2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.1 基因克隆與表達(dá)載體構(gòu)建
            2.2.2 重組原核表達(dá)質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)
            2.2.3 表達(dá)產(chǎn)物的可溶性檢測(cè)
            2.2.4 重組蛋白的純化
            2.2.5 單克隆抗體制備
            2.2.6 H9 亞型禽流感病毒抗體定量檢測(cè)膠體金試紙條的研制
            2.2.7 血凝(HA)與血凝抑制(HI)試驗(yàn)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 HA1₉ 基因的擴(kuò)增
        3.2 pGEX-KG-HA1₉ 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3 目的蛋白的表達(dá)與純化
        3.4 抗多種禽類(lèi)IgY Fc片段單克隆抗體的制備與鑒定
        3.5 H9 亞型禽流感病毒抗體定量檢測(cè)膠體金試紙條的研制
            3.5.1 膠體金溶液的制備與鑒定
            3.5.2 單克隆抗體的膠體金標(biāo)記
            3.5.3 試紙條組成材料的選擇
            3.5.4 溶液系統(tǒng)的選擇
            3.5.5 包被濃度和金標(biāo)噴量的確定
            3.5.6 試紙條性能檢測(cè)
        3.6 H9 亞型禽流感病毒抗體定量檢測(cè)膠體金試紙條的初步應(yīng)用
    4 討論
        4.1 H9 亞型AIV抗體檢測(cè)試紙條檢測(cè)方法的建立
        4.2 膠體金的制備
        4.3 試紙條的初步臨床應(yīng)用分析
    5 結(jié)論
第三章 雞毒支原體抗體檢測(cè)膠體金試紙條的研制與初步應(yīng)用
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗(yàn)材料同第二章
        2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.1 基因的獲取和表達(dá)載體構(gòu)建
            2.2.2 重組原核表達(dá)質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)
            2.2.3 表達(dá)產(chǎn)物的可溶性檢測(cè)同第二章
            2.2.4 重組蛋白的純化
            2.2.5 雞毒支原體抗體檢測(cè)膠體金試紙條的研制
            2.2.6 動(dòng)物試驗(yàn)
            2.2.7 血清平板凝集試驗(yàn)(SPA)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 pGEX-KG-vlhA1.2 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2 目的蛋白的表達(dá)與純化
        3.3 雞毒支原體抗體檢測(cè)膠體金試紙條的研制
            3.3.1 膠體金溶液的制備與鑒定同第二章
            3.3.2 單克隆抗體的膠體金標(biāo)記同第二章
            3.3.3 試紙條組成材料的選擇
            3.3.4 溶液系統(tǒng)的選擇
            3.3.5 包被濃度和金標(biāo)噴量的確定
            3.3.6 試紙條性能檢測(cè)
        3.4 雞毒支原體抗體檢測(cè)膠體金試紙條的初步應(yīng)用
            3.4.1 動(dòng)物試驗(yàn)
            3.4.2 臨床樣品的檢測(cè)
    4 討論
        4.1 膠體金標(biāo)記過(guò)程的影響因素
        4.2 試紙條的初步臨床應(yīng)用分析
    5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
學(xué)術(shù)成果
致謝



本文編號(hào)：3769047