桔梗為桔�？撇荼局参锝酃５母稍锔�,具有宣肺祛痰、利咽和排膿消腫之功效。在桔梗中發(fā)現(xiàn)的化學(xué)成分有多糖、皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、脂肪油、脂肪酸等�，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)桔梗具有止咳平喘、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗炎抑菌、抗腫瘤、降血脂、降血糖、保肝、抗肺損傷等作用。桔梗多糖(PGPS)是中藥桔梗的生物活性成分之一,具有抗氧化、增強(qiáng)免疫和抗腫瘤等作用。Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazine(CCCP)一種質(zhì)子載體,線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑,促使線粒體內(nèi)膜對(duì)H⁺產(chǎn)生通透性,導(dǎo)致線粒體內(nèi)膜兩側(cè)的膜電位喪失,誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。線粒體是細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)中樞,在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用。本研究的目的是探討桔�？偠嗵�(PGPS_t)對(duì)CCCP誘導(dǎo)的3D4/21細(xì)胞線粒體凋亡途徑的潛在保護(hù)作用。采用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞活力,結(jié)果顯示,15μM的CCCP處理細(xì)胞的存活率為51.4%,PGPS_t(100μg/mL、200μg/mL)與CCCP共處理后細(xì)胞存活率分別為62.2%、78.6%,表明PGPS_t能夠抑...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 桔梗概述
        1.1.1 桔梗的化學(xué)成分
        1.1.2 桔梗的藥理作用
            1.1.2.1 止咳祛痰
            1.1.2.2 抗腫瘤
            1.1.2.3 抗炎
            1.1.2.4 免疫調(diào)節(jié)
            1.1.2.5 降血糖、降血脂
            1.1.2.6 保肝護(hù)肝
            1.1.2.7 抗氧化
    1.2 桔梗多糖的藥理作用
    1.3 細(xì)胞凋亡
        1.3.1 線粒體途徑
        1.3.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑
        1.3.3 死亡受體途徑
    1.4 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 細(xì)胞株和桔�？偠嗵�
    2.2 主要試劑
    2.3 主要儀器
    2.4 相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑的配制
        2.4.1 桔梗總多糖溶液的配制
        2.4.2 磷酸鹽緩沖液(PBS)的配制
        2.4.3 10 ×Tris-Glycine Buffer(SDS-PAGE電泳緩沖液)配制
        2.4.4 1 ×蛋白轉(zhuǎn)膜緩沖液配制
        2.4.5 10 ×TBS溶液的配制
        2.4.6 1 ×TBST溶液的配制
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)、復(fù)蘇及凍存
        2.5.2 CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞存活率
        2.5.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率
        2.5.4 激光共聚焦顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞
        2.5.5 線粒體膜電位檢測(cè)
        2.5.6 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        2.5.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 CCCP的細(xì)胞毒性作用
    3.2 PGPSt對(duì)3D4/21 細(xì)胞的增殖作用
    3.3 PGPSt對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用
    3.4 Annexin V-FITC 和 PI 雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)線粒體膜電位變化
    3.6 激光共聚焦顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)變化
    3.7 蛋白免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞中Caspase-9和Cleaved Caspase-3 蛋白表達(dá)的變化
    3.8 蛋白免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞中Bcl-2 蛋白表達(dá)的變化
4 討論
    4.1 桔�？偠嗵菍�(duì)細(xì)胞增殖的影響
    4.2 CCCP誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡-線粒體途徑的選擇
    4.3 桔梗總多糖對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
    4.4 桔�？偠嗵菍�(duì)抗凋亡蛋白Bcl-2 的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3768458