為深入研究豬輪狀病毒VP8蛋白的結(jié)構(gòu)和功能,以及研制新型豬輪狀病毒疫苗,利用生物信息學(xué)軟件DNAStar對本研究室保存的1株A組G9P7型豬輪狀病毒NJ2012的VP8基因序列進行核苷酸和氨基酸同源性分析;設(shè)計并合成1對引物,采用RT-PCR方法擴增VP8蛋白編碼基因,用限制性核酸內(nèi)切酶對目的片段與pET28a(+)原核表達載體進行雙酶切,構(gòu)建了重組原核表達載體,用IPTG誘導(dǎo)表達,并進行Western blot驗證。結(jié)果顯示:NJ2012毒株的VP8基因序列與參考毒株序列的核苷酸同源性為53.9%～99.2%,氨基酸同源性為42.1%～97.5%;VP8基因克隆成功,經(jīng)測序與目的基因完全一致;經(jīng)鑒定,構(gòu)建的重組原核表達質(zhì)粒pET28a-VP8能夠在DE3宿主菌中表達,該蛋白以包涵體形式存在;Western blot結(jié)果顯示該蛋白可與抗His-tag鼠單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)。本研究實現(xiàn)了VP8蛋白在原核系統(tǒng)中穩(wěn)定表達,為調(diào)查該蛋白的免疫原性及研制安全、高效的豬輪狀病毒亞單位疫苗提供了參考。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 引物設(shè)計及PCR擴增
    1.3 VP8序列同源性分析
    1.4 目的基因原核表達載體的構(gòu)建
    1.5 重組VP8蛋白的誘導(dǎo)表達與純化
    1.6 重組VP8蛋白Western blot檢測
2 結(jié)果與分析
    2.1 VP8序列同源性分析
    2.2 VP8基因PCR擴增
    2.3 重組表達質(zhì)粒雙酶切鑒定
    2.4 重組蛋白SDS-PAGE檢測
    2.5 重組VP8蛋白Western blot檢測
    2.6 重組VP8蛋白純化后鑒定
3 討論



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