新城疫(Newcastle Disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus, NDV)引起的一種急性、烈性、高度接觸性禽類傳染病,是危害養(yǎng)禽業(yè)的嚴重疫病之一。預防ND有效的方法之一是免疫接種。常用的是ND弱毒苗和滅活苗,但ND弱毒苗和滅活苗在實際應用中均存在一定的局限性。ND滅活苗雖能夠刺激機體產(chǎn)生細胞免疫和黏膜免疫,但兩者作用都較弱,并伴有接種反應；ND弱毒苗易變異,產(chǎn)生返祖。DNA疫苗既有弱毒苗的優(yōu)點,又有滅活苗的安全性,因此,成為了近年研究的熱點。盡管DNA疫苗在許多方面都優(yōu)于傳統(tǒng)疫苗,但是其易被核酸酶降解,而應用可生物降解材料構建納米粒黏膜免疫遞送系統(tǒng)可避免DNA易降解、免疫次數(shù)多的弊端。本試驗以自行合成的Ag@SiO2核殼納米粒為載體,以新城疫病毒F基因pVAXl-optiF為模型藥物,采用復凝聚法制備pFDNA-Ag@SiO2-NPs,并對pFDNA-Ag@SiO2-NPs理化特性、穩(wěn)定性、細胞毒性和免疫效果等進行了較為詳細的研究。試驗結果表明：1)制備的pFDNA-Ag@SiO2-NPs形態(tài)規(guī)則、外形圓整、分散性好,平均粒徑為511...

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 新城疫概述
        1.1.1 新城疫病毒概述
        1.1.2 新城疫的診斷與控制
        1.1.3 新城疫疫苗
    1.2 基因遞送載體
        1.2.1 病毒載體
        1.2.2 非病毒載體
    1.3 無機納米粒作為基因載體
        1.3.1 羥基磷灰石納米顆粒
        1.3.2 磁性氧化鐵顆粒
        1.3.3 金納米粒
        1.3.4 二氧化硅納米粒
    1.4 黏膜免疫
        1.4.1 黏膜免疫系統(tǒng)的組成和結構
        1.4.2 黏膜疫苗免疫途徑
        1.4.3 禽黏膜免疫系統(tǒng)與疫苗免疫
    1.5 本試驗研究的目的意義及主要內(nèi)容
        1.5.1 本試驗研究的目的意義
        1.5.2 本試驗研究的的主要內(nèi)容
第2章 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 質(zhì)粒、細菌、細胞、病毒與疫苗載體
        2.1.2 試驗動物
        2.1.3 主要生化與分子生物學試劑
        2.1.4 主要儀器設備
        2.1.5 常用溶液的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 NDV pVAX1-optiF的提取
        2.2.2 以Ag@SiO₂為載體的新城疫納米粒DNA疫苗的制備
        2.2.3 氨基化Ag@SiO₂核殼納米粒與質(zhì)粒DNA的結合分析
        2.2.4 抑菌試驗
        2.2.5 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs形態(tài)、粒徑分布和Zeta電位檢測
        2.2.6 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs包封率測定
        2.2.7 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs抗DNase Ⅰ降解試驗
        2.2.8 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs體外釋放試驗
        2.2.9 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs的體外表達
        2.2.10 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs安全性評價
        2.2.11 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs貯藏穩(wěn)定性
        2.2.12 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs免疫效果評價
第3章 結果與分析
    3.1 質(zhì)粒pVAX1-optiF的鑒定
    3.2 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs的制備
        3.2.1 氨基化Ag@SiO₂核殼納米粒與質(zhì)粒DNA的結合
        3.2.2 氨基化Ag@SiO₂核殼納米粒與質(zhì)粒DNA的結合分析
    3.3 抑菌試驗
    3.4 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs形態(tài)、粒徑分布和Zeta電位檢測
    3.5 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs包封率的測定
    3.6 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs抗DNase Ⅰ降解試驗
    3.7 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs的體外釋放試驗
    3.8 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs的體外表達
    3.9 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs安全性評價
        3.9.1 細胞毒性檢測
        3.9.2 安全檢驗
    3.10 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs貯藏穩(wěn)定性
    3.11 pFDNA-Ag@SiO₂-NPs免疫效果評價
        3.11.1 免疫雞血清IgG抗體檢測
        3.11.2 免疫雞黏膜提取液中IgA抗體檢測
        3.11.3 免疫雞淋巴細胞增殖試驗
        3.11.4 雞γ干擾素(IFN-γ)檢測
        3.11.5 雞白介素2(IL-2)檢測
        3.11.6 雞白介素4(IL-4)檢測
        3.11.7 攻毒試驗
第4章 討論
第5章 結論
第6章 本論文的主要創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文情況
攻讀碩士學位期間參與研究課題情況



本文編號：3765897