胚胎發(fā)育過(guò)程中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育存在大量神經(jīng)元的形成和遷移，而神經(jīng)元形成和遷移受到眾多分子的調(diào)控，其中細(xì)胞粘附分子鈣粘蛋白家族成員發(fā)揮重要作用。神經(jīng)鈣粘蛋白(N-Cadherin)最初在雞胚神經(jīng)管中被發(fā)現(xiàn)，是鈣粘蛋白家族成員之一，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中扮演重要角色。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)形成過(guò)程新生細(xì)胞向神經(jīng)元分化或新生神經(jīng)元遷移異常會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常，因此，研究導(dǎo)致神經(jīng)元分化或遷移異常的分子機(jī)制成為發(fā)育神經(jīng)生物學(xué)研究的熱點(diǎn)。本研究以N-Cadherin為關(guān)鍵分子，通過(guò)活體電轉(zhuǎn)基因技術(shù)，實(shí)現(xiàn)雞胚發(fā)育過(guò)程N(yùn)-Cadherin在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的異常表達(dá)，分析其異常表達(dá)后對(duì)軸突形成和神經(jīng)元遷移的影響，進(jìn)一步探討N-Cadherin在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中的功能調(diào)控。研究結(jié)果如下： 1.成功建立了雞胚的帶殼培養(yǎng)和去殼培養(yǎng)方法，同時(shí)也建立和優(yōu)化了活體電轉(zhuǎn)基因技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了目的基因在脊髓和視頂蓋中的表達(dá)，該方法適用于脊髓最佳轉(zhuǎn)染時(shí)間在E2.5-E3(HH stage18-24)，視頂蓋最佳轉(zhuǎn)染時(shí)間在E5(HH stage27)，脊髓轉(zhuǎn)染陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到54.5%，視頂蓋轉(zhuǎn)染陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到60%，完全可以達(dá)到實(shí)...

【文章頁(yè)數(shù)】：113 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
綜述部分
    第一章 鈣粘蛋白研究進(jìn)展
        1.1 鈣粘蛋白的發(fā)現(xiàn)
        1.2 鈣粘蛋白的分類(lèi)
            1.2.1 經(jīng)典鈣粘蛋白
            1.2.2 原鈣粘蛋白
        1.3 鈣粘蛋白研究進(jìn)展
            1.3.1 經(jīng)典鈣粘蛋白研究進(jìn)展
            1.3.2 原鈣粘蛋白研究進(jìn)展
        1.4 鈣粘蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的功能
            1.4.1 經(jīng)典鈣粘蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的功能
            1.4.2 原鈣粘蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的功能
        1.5 鈣粘蛋白研究展望
        1.6 小結(jié)
實(shí)驗(yàn)研究
    第二章 雞胚培養(yǎng)及活體電轉(zhuǎn)基因技術(shù)的建立
        2.1 材料和方法
            2.1.1 材料與儀器
            2.1.2 方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 雞胚胎培養(yǎng)
            2.2.2 活體電轉(zhuǎn)基因技術(shù)
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
    第三章 雞胚活體原位電轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)不同啟動(dòng)子及報(bào)告基因 GFP 表達(dá)的質(zhì)量評(píng)估
        3.1 材料和方法
            3.1.1 材料與儀器
            3.1.2 方法
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 三種質(zhì)粒啟動(dòng)子的生物信息學(xué)分析
            3.2.2 雞胚發(fā)育過(guò)程三種質(zhì)粒表達(dá)強(qiáng)度差異分析
            3.2.3 組織切片上對(duì) 3 種不同質(zhì)粒在脊髓中表達(dá)強(qiáng)度的分析
            3.2.4 各組間雞胚胎發(fā)育形態(tài)結(jié)構(gòu)的比較
            3.2.5 GFP 表達(dá)對(duì)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)的影響
            3.2.6 GFP 表達(dá)對(duì)神經(jīng)絲蛋白表達(dá)的影響
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 N-Cadherin 真核表達(dá)載體的篩選及其在 293T 細(xì)胞中表達(dá)效率的分析
        4.1 材料和方法
            4.1.1 材料與儀器
            4.1.2 方法
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 干擾載體的篩選
            4.2.2 N-Cadherin 的異常表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響
            4.2.3 N-Cadherin 的異常表達(dá)對(duì) catenin 的調(diào)控
            4.2.4 N-Cadherin 的異常表達(dá)對(duì)細(xì)胞骨架蛋白的影響
            4.2.5 N-Cadherin 異常表達(dá)后細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
    第五章 雞胚發(fā)育過(guò)程 N-Cadherin 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達(dá)模式
        5.1 材料和方法
            5.1.1 材料與儀器
            5.1.2 方法
        5.2 結(jié)果
            5.2.1 神經(jīng)鈣粘蛋白在脊髓中的表達(dá)
            5.2.2 神經(jīng)絲蛋白在脊髓中的表達(dá)及其與 N-Cadherin 表達(dá)的異同
            5.2.3 神經(jīng)鈣粘蛋白在視頂蓋中的表達(dá)模式
            5.2.4 神經(jīng)絲蛋白在視頂蓋中的表達(dá)模式及其與 N-Cadherin 表達(dá)的異同
        5.3 討論
        5.4 小結(jié)
    第六章 雞胚發(fā)育過(guò)程 N-Cadherin 異常表達(dá)對(duì)脊髓神經(jīng)軸突投射的影響
        6.1 材料和方法
            6.1.1 材料
            6.1.2 方法
        6.2 結(jié)果
            6.2.1 N-Cadherin 在雞胚脊髓中的超表達(dá)和下調(diào)表達(dá)
            6.2.2 全脊髓展開(kāi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            6.2.3 N-Cadherin 異常表達(dá)對(duì)脊髓中 catenin 表達(dá)的影響
            6.2.4 N-Cadherin 和β-catenin 異常表達(dá)對(duì)脊髓神經(jīng)突起向?qū)?cè)投射的影響
            6.2.5 脊髓中 N-Cadherin 異常表達(dá)對(duì)脊髓相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        6.3 討論
        6.4 小結(jié)
    第七章 雞胚發(fā)育過(guò)程 N-Cadherin 異常表達(dá)對(duì)視頂蓋神經(jīng)元遷移的影響
        7.1 材料與方法
            7.1.1 材料與儀器
            7.1.2 方法
        7.2 結(jié)果
            7.2.1 雞胚視頂發(fā)育過(guò)程中神經(jīng)元增殖、遷移和分層形成規(guī)律的研究
            7.2.2 N-Cadherin 在視頂蓋中的超表達(dá)或下調(diào)表達(dá)
            7.2.3 N-Cadherin 在視頂蓋中的超表達(dá)或下調(diào)表達(dá)對(duì) NF 表達(dá)的影響
            7.2.4 N-Cadherin 在視頂蓋中的超表達(dá)或下調(diào)表達(dá)對(duì)β-catenin 表達(dá)的影響
            7.2.5 N-Cadherin 在視頂蓋中的超表達(dá)或下調(diào)表達(dá)對(duì) Pax-7 表達(dá)的影響
        7.3 討論
        7.4 小結(jié)
結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
主要縮略詞和中英文對(duì)照表（Abbreviation Index）
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3765832