綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)是引起綿羊、山羊呼吸系統(tǒng)感染并導(dǎo)致非典型性肺炎的主要病原菌,給全球養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。接種疫苗是防治該病最為有效的方式,而制約疫苗行業(yè)發(fā)展的瓶頸是Mo大量體外培養(yǎng)難的問題,因此,如何提高M(jìn)o的生長(zhǎng)滴度是亟待解決的問題。在我國,羊支原體性肺炎主要由綿羊肺炎支原體和絲狀支原體山羊亞種(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)引起。但在相同培養(yǎng)條件下,Mmc較Mo具有易于培養(yǎng),生長(zhǎng)滴度高等優(yōu)勢(shì)。因此,本研究采用Illumina公司的HiSeq測(cè)序平臺(tái)分別對(duì)Mo NM-151分離株和Mmc PG3標(biāo)準(zhǔn)株不同生長(zhǎng)階段(對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期)的樣本進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)及生物信息學(xué)分析,通過分析比較測(cè)序結(jié)果,在基因?qū)用嬲页鯩mc易于Mo培養(yǎng)的關(guān)鍵因素,并以此為依據(jù)提出Mo培養(yǎng)基的改良方案,并通過培養(yǎng)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。1.結(jié)合差異表達(dá)基因富集的KEGG PATHWAY和通路中部分基因的RPKM值對(duì)Mo NM-151分離株和Mmc PG3標(biāo)準(zhǔn)株的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析比較,發(fā)現(xiàn)葡萄糖...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 支原體研究進(jìn)展
    1.2 支原體的生物學(xué)特性
        1.2.1 分類學(xué)和形態(tài)學(xué)特征
        1.2.2 培養(yǎng)特性及染色
        1.2.3 遺傳特性
        1.2.4 支原體的抗性
    1.3 支原體的致病機(jī)理
    1.4 支原體的流行概況
        1.4.1 流行病學(xué)
        1.4.2 臨床癥狀
        1.4.3 病理變化
    1.5 實(shí)驗(yàn)室診斷
        1.5.1 病原的分離培養(yǎng)
        1.5.2 免疫學(xué)診斷
        1.5.3 分子生物學(xué)診斷
    1.6 防治
    1.7 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的研究概況
    1.8 Mo培養(yǎng)基的研究概況
    1.9 本研究的目的、意義及內(nèi)容
2 研究一MoNM-151株與MmcPG3株轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析比較
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 葡萄糖代謝
        2.3.2 核苷酸代謝
    2.4 討論
        2.4.1 葡萄糖代謝
        2.4.3 核苷酸代謝
    2.5 小結(jié)
3 研究二添加葡萄糖、絲氨酸的培養(yǎng)效果
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌種來源
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 培養(yǎng)基的配制
        3.2.2 Mo的接種及培養(yǎng)
        3.2.3 測(cè)量OD_630nm值最佳離心時(shí)間的篩選
        3.2.4 Mo生長(zhǎng)滴度的測(cè)定
        3.2.5 pH值的測(cè)定
        3.2.6 OD_630nm值的測(cè)定
        3.2.7 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 最佳離心時(shí)間的篩選
        3.3.2 生長(zhǎng)曲線的繪制
        3.3.3 pH值的測(cè)定
        3.3.4 OD630nm值的測(cè)定
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 研究三緩沖體系的篩選及Mo培養(yǎng)基的改良
    4.1 緩沖體系的篩選
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)方法
        4.1.3 結(jié)果與分析
        4.1.4 討論
    4.2 Mo培養(yǎng)基的改良
        4.2.1 試驗(yàn)材料
        4.2.2 試驗(yàn)方法
        4.2.3 結(jié)果與分析
        4.2.4 討論
    4.3 改良培養(yǎng)基初始pH值的影響
        4.3.1 試驗(yàn)材料
        4.3.2 試驗(yàn)方法
        4.3.3 Mo的接種及培養(yǎng)
        4.3.4 結(jié)果與分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 總體討論
6 全文結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3764133