我國擁有世界上最豐富的家鴨品種資源,養(yǎng)鴨量和消費量均占世界第一。近年來我國鴨肉產(chǎn)量逐步上升,但仍然不能完全滿足日益增長的消費需求,養(yǎng)鴨業(yè)看似前景廣闊,但其存在的問題也較多,其中育種技術(shù)水平不高、個體產(chǎn)肉能力不高等問題較為突出,極大地阻礙了肉鴨產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。因此,利用先進(jìn)的育種和分子技術(shù)手段提高動物個體的產(chǎn)肉量顯得尤為必要。 胚胎期是家禽生長發(fā)育無法逾越的重要階段,這一時期動物肌肉的生長發(fā)育對成年家禽的產(chǎn)肉能力影響巨大,通過促進(jìn)胚胎期骨骼肌生長發(fā)育的方法,是提高個體產(chǎn)肉量的最有效的可能方法之一。鑒于禽類胚胎期如此重要的作用,本研究選擇了我國地方家鴨品種中成年體重較大、生長速度較快的高郵鴨和體重較小、生長速度較慢的金定鴨為研究素材,來解析它們在胚胎期的相關(guān)生長發(fā)育指標(biāo)及骨骼肌生長發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)等方面的差異及其原因,并深入研究生肌調(diào)節(jié)因子(MRFs)、鈣蛋白酶3和外源性甲狀腺激素(T3)對鴨胚胎期骨骼肌生長發(fā)育的作用,以期能在胚胎期發(fā)掘與鴨個體產(chǎn)肉量相關(guān)的重要基因,為相關(guān)遺傳改良方法的建立奠定基礎(chǔ)理論知識。主要的研究結(jié)果如下： 1.利用高郵鴨和金定鴨種蛋進(jìn)行人工孵化,觀察不同時期的胚胎發(fā)...

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
本文部分的符號說明
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 我國地方家鴨資源豐富
        1.1 高郵鴨品種及其相關(guān)研究的概述
            1.1.1 基本情況
            1.1.2 品種的形成
            1.1.3 體型外貌
            1.1.4 生產(chǎn)性能與特點
            1.1.5 高郵鴨相關(guān)科學(xué)研究
        1.2 金定鴨品種及其相關(guān)研究的概述
            1.2.1 基本情況
            1.2.2 品種的形成
            1.2.3 體型外貌
            1.2.4 生產(chǎn)性能與特點
            1.2.5 金定鴨相關(guān)科學(xué)研究
    2 禽類胚胎期對產(chǎn)肉性能的重要作用
    3 肌肉生長發(fā)育形成的機(jī)制
        3.1 肌肉的結(jié)構(gòu)
        3.2 肌纖維的分類
        3.3 生肌調(diào)節(jié)因子家族(MRFs)
    4 鈣蛋白酶
    5 甲狀腺激素
        5.1 甲狀腺激素的主要生理作用
        5.2 甲狀腺激素對肌肉生長發(fā)育的作用
    6 實時熒光定量PCR技術(shù)及其在基因表達(dá)中的應(yīng)用
        6.1 實時熒光定量PCR技術(shù)的原理與特點
        6.2 熒光定量PCR的化學(xué)原理
            6.2.1 SYBR Green Ⅰ染料法
            6.2.2 TaqMan探針法
        6.3 實時熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)(一)
第二章 鴨胚胎發(fā)育觀察及圖譜的建立
    1 材料和方法
        1.1 試驗素材
        1.2 試驗儀器
        1.3 孵化條件
        1.4 胚胎觀察和數(shù)據(jù)采集
        1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 胚胎期胚胎重量變化分析
        2.2 胚胎發(fā)育觀察及圖譜的建立
            2.2.1 發(fā)育早期
            2.2.2 發(fā)育后期
    3 討論
    參考文獻(xiàn)(二)
第三章 高郵鴨和金定鴨胚胎期生長發(fā)育差異比較
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料與孵化方法
        1.2 胚蛋的解剖
        1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
            1.3.1 累積生長
            1.3.2 絕對生長
            1.3.3 相對生長
            1.3.4 分化生長
            1.3.5 數(shù)據(jù)差異比較
    2 結(jié)果與分析
        2.1 高郵鴨胚胎期生長發(fā)育性能指標(biāo)測定及分析
            2.1.1 高郵鴨不同胚齡生長發(fā)育性能指標(biāo)測定
            2.1.2 高郵鴨不同胚齡生長發(fā)育性能指標(biāo)的變化情況
        2.2 金定鴨胚胎期生長發(fā)育性能指標(biāo)測定及分析
            2.2.1 金定鴨不同胚齡生長發(fā)育性能指標(biāo)測定
            2.2.2 金定鴨不同胚齡生長發(fā)育性能指標(biāo)的變化情況
        2.3 高郵鴨和金定鴨重要生長發(fā)育性能指標(biāo)的比較
    3 討論
    參考文獻(xiàn)(三)
第四章 鴨胚胎期生肌調(diào)節(jié)因子mRNA表達(dá)規(guī)律及其與胸腿肌生長發(fā)育關(guān)系的研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 試驗方法
            1.3.1 總RNA提取和cDNA合成
            1.3.2 引物設(shè)計、目的片段的克隆
            1.3.3 實時熒光定量PCR
            1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            1.3.5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 四個基因的Real-time PCR擴(kuò)增曲線、溶解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.1.1 MyoD基因Real-time PCR擴(kuò)增曲線、溶解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.1.2 MyoG基因Real-time PCR擴(kuò)增曲線、溶解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.1.3 Myf6基因Real-time PCR擴(kuò)增曲線、溶解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.1.4 Myf5基因Real-time PCR擴(kuò)增曲線、溶解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.2 胚胎期和出生早期不同鴨品種胸腿肌組織中MyoDl基因mRNA表達(dá)規(guī)律研究
            2.2.1 MyoD1基因在高郵鴨和金定鴨胚胎期和出生早期胸肌組織中的mRNA表達(dá)規(guī)律
            2.2.2 鴨胸肌MyoD1基因mRNA的表達(dá)量與胚重和胸肌重的相關(guān)性分析
            2.2.3 MyoD1基因在高郵鴨和金定鴨胚胎期和出生早期腿肌組織中的mRNA表達(dá)規(guī)律
            2.2.4 鴨腿肌MyoD1基因mRNA表達(dá)量與胚重和腿肌重的相關(guān)性分析
        2.3 胚胎期和出生早期不同鴨品種胸腿肌組織中MyoG基因mRNA表達(dá)規(guī)律研究
            2.3.1 MyoG基因在高郵鴨和金定鴨胚胎期和出生早期胸肌組織中的mRNA表達(dá)規(guī)律
            2.3.2 鴨胸肌MyoG基因mRNA表達(dá)量與胚重和胸肌重的相關(guān)性分析
            2.3.3 MyoG基因在高郵鴨和金定鴨胚胎期和出生早期腿肌組織中的mRNA表達(dá)規(guī)律
            2.3.4 鴨腿肌MyoG基因mRNA表達(dá)量與胚重和腿肌重的相關(guān)性分析
        2.4 胚胎期和出生早期不同鴨品種胸腿肌組織中Myf6基因mRNA表達(dá)規(guī)律研究
            2.4.1 Myf6基因在高郵鴨和金定鴨胚胎期和出生早期胸肌組織中的mRNA表達(dá)規(guī)律
            2.4.2 鴨胸肌Myf6基因mRNA表達(dá)量與胚重和胸肌重的相關(guān)性分析
            2.4.3 Myf6基因在高郵鴨和金定鴨胚胎期和出生早期腿肌組織中的mRNA表達(dá)規(guī)律
            2.4.4 鴨腿肌Myf6基因mRNA表達(dá)量與胚重和腿肌重的相關(guān)性分析
        2.5 胚胎期和出生早期不同鴨品種胸腿肌組織中Myf5基因mRNA表達(dá)規(guī)律研究
            2.5.1 Myf5基因在高郵鴨和金定鴨胚胎期和出生早期胸肌組織中的mRNA表達(dá)規(guī)律
            2.5.2 鴨胸肌Myf5基因mRNA表達(dá)量與胚重和胸肌重的相關(guān)性分析
            2.5.3 Myf5基因在高郵鴨和金定鴨胚胎期和出生早期腿肌組織中的mRNA表達(dá)規(guī)律
            2.5.4 鴨腿肌Myf5基因mRNA表達(dá)量與胚重和腿肌重的相關(guān)性分析
    3 討論
        3.1 MyoD1基因?qū)喤咛テ诩俺錾缙谛赝燃∩L發(fā)育的作用
        3.2 MyoG基因?qū)喤咛テ诩俺錾缙谛赝燃∩L發(fā)育的作用
        3.3 Myf6基因?qū)喤咛テ诩俺錾缙谛赝燃∩L發(fā)育的作用
        3.4 Myf5基因?qū)喤咛テ诩俺錾缙谛赝燃∩L發(fā)育的作用
    參考文獻(xiàn)(四)
第五章 鴨胚骨骼肌成肌細(xì)胞中生肌調(diào)節(jié)因子的mRNA表達(dá)特性分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 試驗方法
            1.3.1 成肌細(xì)胞的分離純化
            1.3.2 RNA提取和質(zhì)量檢測
            1.3.3 cDNA第一鏈的合成
            1.3.4 引物設(shè)計、目的片段的克隆和標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒制備
            1.3.5 實時熒光定量PCR反應(yīng)
            1.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            1.3.7 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 鴨胸肌成肌細(xì)胞中生肌調(diào)節(jié)因子的mRNA表達(dá)規(guī)律
        2.2 鴨腿肌成肌細(xì)胞中生肌調(diào)節(jié)因子的mRNA表達(dá)規(guī)律
    3 討論
    參考文獻(xiàn)(五)
第六章 外源性甲狀腺激素T3對鴨胚胎生長發(fā)育及成肌細(xì)胞生肌因子表達(dá)的影響
    1 鴨種蛋內(nèi)注射T3及胚胎生長發(fā)育性能的測定
        1.1 材料與方法
            1.1.1 鴨種蛋的準(zhǔn)備
            1.1.2 主要試劑與設(shè)備
            1.1.3 T3試劑配置
            1.1.4 鴨種蛋消毒與錐孔
            1.1.5 蛋內(nèi)注射并封孔
            1.1.6 種蛋孵化
            1.1.7 涼蛋
            1.1.8 鴨生長發(fā)育指標(biāo)測定
            1.1.9 血清中T3、T4的測定
            1.1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        1.2 T3對成肌細(xì)胞中生肌因子mRNA表達(dá)量的影響
            1.2.1 試驗素材
            1.2.2 實驗試劑與設(shè)備
            1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)與分離
            1.2.4 T3干擾
            1.2.5 RNA提取
            1.2.6 實時熒光定量PCR
            1.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 種蛋內(nèi)注射T3的鴨胚胎期及出生早期生長發(fā)育觀測
        2.2 T3干擾的成肌細(xì)胞中生肌因子mRNA表達(dá)變化規(guī)律
            2.2.1 成肌細(xì)胞中Myf6基因mRNA表達(dá)變化規(guī)律
            2.2.2 成肌細(xì)胞中Myf5基因mRNA表達(dá)量的變化規(guī)律
            2.2.3 成肌細(xì)胞中MyoD1基因mRNA表達(dá)量的變化規(guī)律
    3 討論
        3.1 T3對鴨胚胎期和出生后早期生長發(fā)育的影響
        3.2 T3對鴨胚胎成肌細(xì)胞生肌因子mRNA表達(dá)的影響
    參考文獻(xiàn)(六)
第七章 鴨骨骼肌早期發(fā)育過程中CAPN3基因表達(dá)及其與肌纖維性狀的關(guān)系
    1 材料與方法
        1.1 試驗動物
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 肌纖維性狀測定
        1.4 總RNA提取和cDNA合成
        1.5 引物設(shè)計、目的片段標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        1.6 熒光實時定量PCR
        1.7 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 肌纖維類型的鑒定和方法的比較
        2.2 鴨早期發(fā)育過程中肌纖維的發(fā)育性變化
        2.3 CAPN3基因在不同鴨品種胚胎期和出雛早期胸肌中的表達(dá)
        2.4 CAPN3基因在不同鴨品種胚胎期和出雛早期腿肌中的表達(dá)
    3 討論
        3.1 鴨骨骼肌肌纖維類型的鑒別
        3.2 CAPN3基因mRNA表達(dá)與鴨早期發(fā)育中骨骼肌纖維性狀的關(guān)系
    參考文獻(xiàn)(七)
第八章 全文結(jié)論與創(chuàng)新點
    1 全文結(jié)論
    2 創(chuàng)新點
附錄1 鴨胚胎骨骼標(biāo)本制作方法的建立
附錄2 一種分離純化鴨胚骨骼肌成肌細(xì)胞的方法
附錄3 一種鑒別鴨骨骼肌中肌纖維類型的方法
致謝
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本文編號：3759617