一氧化氮(Nitric oxide,NO)作為一種具有自由基性質(zhì)的多功能活性分子,在體內(nèi)多種信號傳遞中起重要作用。體內(nèi)的NO主要由一氧化氮合酶(NOS)催化產(chǎn)生,現(xiàn)已確認的NOS包含三種亞型：神經(jīng)型(nNOS)、誘導(dǎo)型(iNOS)、內(nèi)皮型(eNOS)。由于NO的半衰期非常短而且極不穩(wěn)定,而NOS是NO產(chǎn)生的限速酶,因此NOS的表達量可以線性反映出NO的生成量。隨著對NO的廣泛研究,發(fā)現(xiàn)其與生殖存在著必不可少的某些聯(lián)系,特別在動物個體發(fā)育的早期。為了了解一氧化氮合酶(NOS)的三個亞型在綿羊卵母細胞體外成熟及早期胚胎中的表達情況,本實驗,運用體外培養(yǎng)體系獲得未成熟卵母細胞、成熟卵母細胞及不同發(fā)育時期的早期胚胎(2-細胞、4-細胞、8-細胞、桑葚胚、囊胚),應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測目標基因nNOS、eNOS、iNOS相對表達情況。結(jié)果顯示： 1.在綿羊未成熟卵母細胞、成熟卵母細胞和早期胚胎發(fā)育各階段,nNOS、eNOS、 iNOS mRNA均有表達。 2.綿羊卵母細胞成熟過程中,nNOS mRNA相對表達量在未成熟卵母細胞期及成熟卵母細胞期均顯著高于eNOS、iNOS的表達量(p&l...

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【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 一氧化氮的發(fā)現(xiàn)
    1.2 一氧化氮的性質(zhì)
    1.3 一氧化氮的合成
        1.3.1 酶參與合成
        1.3.2 非酶合成途徑
    1.4 一氧化氮合酶
        1.4.1 一氧化氮合酶的分類及命名
        1.4.2 一氧化氮合酶的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特性
        1.4.3 一氧化氮合酶對一氧化氮生成的調(diào)控
    1.5 一氧化氮的作用機制
    1.6 一氧化氮的生物學(xué)作用
        1.6.1 一氧化氮與心血管系統(tǒng)
        1.6.2 一氧化氮與免疫系統(tǒng)
        1.6.3 一氧化氮與雄性生殖系統(tǒng)
        1.6.4 一氧化氮與雌性生殖系統(tǒng)
    1.7 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料、試劑及主要儀器、耗材
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗主要試劑
        2.1.3 實驗主要儀器及耗材
    2.2 方法
        2.2.1 卵巢的獲得、運輸及處理
        2.2.2 卵母細胞的收集
        2.2.3 卵母細胞的體外成熟
        2.2.4 凍精激活
        2.2.5 成熟卵母細胞的體外受精
        2.2.6 胚胎培養(yǎng)
        2.2.7 總RNA的提取
        2.2.8 總RNA的檢測
        2.2.9 RT-PCR反應(yīng)
        2.2.10 引物的設(shè)計與合成
        2.2.11 實時熒光定量PCR反應(yīng)
3 結(jié)果與分析
    3.1 總RNA的檢測
    3.2 實時熒光定量PCR結(jié)果
        3.2.1 擴增曲線和溶解曲線
        3.2.2 nNOS、eNOS、iNOS和GAPDH基因表達的熒光定量擴增效率曲線
        3.2.3 熒光定量PCR產(chǎn)物電泳檢測及測序,
        3.2.4 NOS在卵母細胞體外成熟及早期胚胎中的相對表達
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
作者簡介



本文編號：3758900