田鼠巴貝蟲(Babesia microti)是寄生于鼠、人或其他哺乳動物紅細(xì)胞內(nèi)的一種血液原蟲,可引起人獸共患病。被田鼠巴貝蟲侵染的宿主出現(xiàn)發(fā)熱、貧血和血紅蛋白尿等一系列臨床癥狀,造成宿主的肝臟和腎臟損傷。免疫力低下者如果患田鼠巴貝蟲病,同時可誘發(fā)多種并發(fā)癥,甚至導(dǎo)致死亡。田鼠巴貝蟲分布廣泛,主要分布于美洲、歐洲、亞洲和非洲等地,中國也是該病發(fā)生的主要國家之一,對畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅,對其研究具有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)小鼠被田鼠巴貝蟲侵染后,肝臟組織受到了嚴(yán)重?fù)p傷,出現(xiàn)明顯腫脹,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂滴沉積,細(xì)胞外形和線粒體等細(xì)胞器發(fā)生形態(tài)改變。為了更深入的探究田鼠巴貝蟲引起肝臟損傷的分子機(jī)制,我們運(yùn)用DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法,研究了小鼠被田鼠巴貝蟲侵染后的感染期至恢復(fù)期,肝臟組織中全部蛋白質(zhì)表達(dá)量以及磷酸化修飾的變化,探究肝臟在損傷和修復(fù)過程中蛋白質(zhì)變化的規(guī)律和作用。為研究田鼠巴貝蟲對宿主造成的損傷和機(jī)體修復(fù)機(jī)制奠定基礎(chǔ),為更有效地診斷和治療該疾病提供新思路和新方法。感染田鼠巴貝蟲的宿主肝臟組織中全部蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定結(jié)果顯示,感染第0 d、5d、8 d、11 d和19 d共鑒定到...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1.1 巴貝蟲及巴貝蟲病簡介
    1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)
        1.2.1 蛋白質(zhì)組學(xué)定義
        1.2.2 定量蛋白質(zhì)組學(xué)
    1.3 蛋白質(zhì)翻譯后修飾
        1.3.1 蛋白質(zhì)翻譯后修飾
        1.3.2 蛋白質(zhì)磷酸化修飾的定義、富集方法及在田鼠巴貝蟲方面的研究進(jìn)展
    1.4 利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法開展巴貝蟲相關(guān)研究
    1.5 研究目的和意義
第二章 小鼠感染田鼠巴貝蟲后肝臟組織的病理學(xué)變化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.2.1 小鼠模型建立
        2.2.2 組織解剖觀察
        2.2.3 HE染色石蠟切片制備
        2.2.4 透射電鏡樣品制備
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 吉姆薩血涂片觀察
        2.3.2 肝臟組織解剖觀察
        2.3.3 光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察
    2.4 討論
第三章 小鼠感染田鼠巴貝蟲后肝臟組織的蛋白質(zhì)組學(xué)變化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
    3.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        3.2.1 被田鼠巴貝蟲侵染小鼠的飼養(yǎng)及肝臟解剖
        3.2.2 蛋白提取
        3.2.3 蛋白酶解及脫鹽
        3.2.4 TiO₂ 磷酸化富集
        3.2.5 高效液相色譜(HPLC)反相分級分離
        3.2.6 DDA質(zhì)譜分析建立譜圖庫
        3.2.7 DIA質(zhì)譜分析
        3.2.8 生物信息學(xué)分析
            3.2.8.1 質(zhì)譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)果統(tǒng)計(jì)
            3.2.8.2 質(zhì)譜數(shù)據(jù)聚類分析
            3.2.8.3 GO功能注釋分析
            3.2.8.4 KEGG通路分析
            3.2.8.5 蛋白質(zhì)互作分析
        3.2.9 PRM驗(yàn)證
            3.2.9.1 篩選進(jìn)行PRM驗(yàn)證的蛋白質(zhì)
            3.2.9.2 PRM質(zhì)譜分析
            3.2.9.3 Skyline搜庫分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 肝臟組織全蛋白實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.3.1.1 蛋白質(zhì)鑒定
            3.3.1.2 差異表達(dá)蛋白聚類分析
            3.3.1.3 差異表達(dá)蛋白質(zhì)的GO注釋分析
            3.3.1.4 四個Cluster中蛋白質(zhì)的GO注釋分析
            3.3.1.5 差異表達(dá)蛋白質(zhì)的KEGG通路分析
            3.3.1.6 差異表達(dá)蛋白質(zhì)的互作分析
            3.3.1.7 PRM驗(yàn)證分析
        3.3.2 肝臟組織磷酸化蛋白實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.3.2.1 磷酸化蛋白質(zhì)定量結(jié)果
            3.3.2.2 差異修飾磷酸化肽段的聚類分析
            3.3.2.4 差異修飾磷酸化蛋白質(zhì)的GO注釋分析
            3.3.2.5 四個Cluster中的磷酸化蛋白質(zhì)分別進(jìn)行GO注釋分析
            3.3.2.6 差異修飾磷酸化蛋白質(zhì)的KEGG通路分析
            3.3.2.7 差異修飾磷酸化蛋白質(zhì)的互作分析
    3.4 討論
        3.4.1 與脂質(zhì)代謝相關(guān)的蛋白
        3.4.2 與免疫相關(guān)的蛋白
        3.4.3 與機(jī)體生長發(fā)育相關(guān)蛋白
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的科研成果清單
致謝



本文編號：3756664