新城疫是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的急性傳染病。盡管疫苗的廣泛使用令新城疫得到了一定的控制,但近年來伴隨毒力的不斷增強(qiáng),導(dǎo)致疫苗免疫的失敗,其仍然嚴(yán)重制約著養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展。因此,從分子水平解析雞對病毒感染的應(yīng)答機(jī)制,尋找機(jī)體抗病相關(guān)的關(guān)鍵基因,通過遺傳選育提高雞的抗病能力將是家禽發(fā)展的主要方向。Toll樣受體(TLRs)是機(jī)體一類重要的模式識別受體,其通過細(xì)胞的多種蛋白誘導(dǎo)機(jī)體的抗病毒免疫反應(yīng),但雞的TLRs是否參與了機(jī)體抵抗新城疫病毒入侵的免疫應(yīng)答反應(yīng)呢?本試驗選用SPF(無特定病原)羅曼蛋雞,隨機(jī)分成3組：每組35只雞,其中的兩組在14日齡分別接種新城疫強(qiáng)毒株-F48E9和中等毒株-Mukteswar。在感染后的1、2、4天,每個組分別采集5只雞,每只雞采集脾臟,胸腺和法氏囊組織。通過定量PCR分析TLRs基因和炎癥相關(guān)基因在雞抵抗新城疫病毒過程中的表達(dá)變化,同時,我們比較了這些基因在雞感染不同毒力病毒后的表達(dá)量的變化,探討不同毒株的致病機(jī)理。主要試驗結(jié)果如下：TLR3的表達(dá)量在3個組織中都有一定的增加,兩攻毒組脾臟組織TLR3在2天時表達(dá)量最高,胸腺和法氏囊中TLR3表達(dá)量呈逐漸上升趨...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用詞語縮寫
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 抗病育種的研究現(xiàn)狀
    1.2 雞免疫系統(tǒng)簡介
    1.3 先天免疫系統(tǒng)簡介
    1.4 Toll-like受體基因家族
        1.4.1 TLRs的結(jié)構(gòu)
        1.4.2 TLRs的分布
        1.4.3 TLRs的分類
        1.4.4 TLRs通路主要的銜接蛋白
        1.4.5 TLRs介導(dǎo)的信號通路
    1.5 炎癥相關(guān)基因簡介
    1.6 Toll-like受體及炎癥相關(guān)因子在雞先天免疫中的作用
        1.6.1 雞TLRs簡介
        1.6.2 雞TLRs的分布
        1.6.3 TLRs在雞抗病毒反應(yīng)中的作用
        1.6.4 炎癥相關(guān)因子在雞抗病毒反應(yīng)中的作用
    1.7 雞新城疫簡介
        1.7.1 新城疫臨床癥狀
        1.7.2 新城疫病毒
        1.7.3 新城疫病毒的遺傳演變和在我國的流行現(xiàn)狀
    1.8 本研究的目的和意義
2 材料和方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 孵化育雛
        2.1.3 攻毒采樣
    2.2 主要試劑及耗材
    2.3 主要儀器設(shè)備
    2.4 技術(shù)路線
    2.5 試驗方法
        2.5.1 試驗SPF雞的飼喂
        2.5.2 組織RNA Trizol提取法
        2.5.3 RNA反轉(zhuǎn)錄PCR
        2.5.4 熒光定量PCR的條件優(yōu)化
        2.5.5 熒光定量PCR
    2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 RNA提取效果檢測
    3.2 目的基因片段擴(kuò)增
    3.3 目的基因的熔解曲線
    3.4 兩攻毒組脾臟中TLR基因的表達(dá)差異
    3.5 兩攻毒組胸腺中TLR基因的表達(dá)差異
    3.6 兩攻毒組法氏囊中TLR基因的表達(dá)差異
    3.7 兩攻毒組各組織中中MyD88和TRIF的表達(dá)差異
    3.8 核因子-KB及其抑制蛋白在組織中的表達(dá)差異
    3.9 炎癥相關(guān)基因在組織中的表達(dá)差異
4 討論
    4.1 TLR3對不同毒力新城疫病毒的差異性免疫應(yīng)答
    4.2 TLR7對不同毒力新城疫病毒的差異性免疫應(yīng)答
    4.3 TLR15對不同毒力新城疫病毒的差異性免疫應(yīng)答
    4.4 TLR21對不同毒力新城疫病毒的差異性免疫應(yīng)答
    4.5 雞感染不同毒力病毒后炎癥基因的差異性應(yīng)答反應(yīng)
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)成果情況



本文編號：3756626