本研究制苗用毒株為豬偽狂犬病病毒HB2000株，是由豬偽狂犬病病毒鄂A株經(jīng)基因敲除技術(shù)缺失TK、gE、gI基因部分核苷酸得到的TK-/gE-/gp63-突變株(gp63基因即gI基因)，中和試驗(yàn)結(jié)果表明，HB2000株病毒能被PRV特異性血清中和；PCR結(jié)果證明，可擴(kuò)增出特異性的748bp TK基因片段和514bp gE-gI基因片段，毒種特異性良好。 應(yīng)用響應(yīng)面法(RSM)，篩選并優(yōu)化耐熱保護(hù)劑配方，試驗(yàn)結(jié)果表明：谷氨酸鈉、L-精氨酸鹽酸鹽和D-山梨醇能夠顯著提高病毒對(duì)凍干環(huán)境的耐受能力；酶解酪蛋白、海藻糖、明膠、蔗糖和牛血清白蛋白顯著性依次遞減；以?xún)龈珊蟛《颈Ｗo(hù)率為響應(yīng)值，響應(yīng)面優(yōu)化出最佳配方為：谷氨酸鈉2%、L-精氨酸鹽酸鹽2%、酶解酪蛋白7.6%、D-山梨醇2%、明膠4%、海藻糖1%、牛血清白蛋白2%、蔗糖15.2%。采用該配方進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，凍干保護(hù)率達(dá)到80.40%；耐老化試驗(yàn)中37℃保存7日及2⁸℃保存24個(gè)月，病毒滴度下降分別為0.47、0.55、0.62及0.41、0.47、0.51，該配方制備的活疫苗熱穩(wěn)定性良好。 依據(jù)凍存試驗(yàn)和共熔點(diǎn)測(cè)定結(jié)果，...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
目錄
外文縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬偽狂犬病病毒 TK、gE、gp63 基因
        1.1.1 豬偽狂犬病病毒 TK 基因結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.2 豬偽狂犬病病毒 gE 基因結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.3 豬偽狂犬病病毒 gI 基因結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.4 豬偽狂犬病病毒鄂 A 株的 TK-/gE-/gI-突變株
    1.2 耐熱凍干保護(hù)劑
        1.2.1 耐熱凍干保護(hù)劑基質(zhì)分類(lèi)
        1.2.2 耐熱凍干保護(hù)劑保護(hù)機(jī)理
        1.2.3 耐熱凍干保護(hù)劑配制和保存
        1.2.4 耐熱凍干保護(hù)劑篩選方法
    1.3 冷凍干燥工藝
        1.3.1 凍干工藝程序
        1.3.2 耐熱保護(hù)劑凍干工藝優(yōu)化
        1.3.3 凍干過(guò)程中異�，F(xiàn)象處理
    1.4 總結(jié)
第二章 豬偽狂犬病病毒鑒別及細(xì)胞培養(yǎng)
    2.1 引言
    2.2 試驗(yàn)材料
        2.2.1 毒種、細(xì)胞及雞胚
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)主要試劑
        2.2.3 儀器
    2.3 方法
        2.3.1 豬偽狂犬病病毒 HB2000 株鑒別檢驗(yàn)
        2.3.2 豬偽狂犬病病毒 HB2000 株的培養(yǎng)
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 豬偽狂犬病病毒 HB2000 株鑒別檢驗(yàn)結(jié)果
        2.4.2 豬偽狂犬病病毒 HB2000 株的培養(yǎng)結(jié)果
    2.5 小結(jié)
    2.6 討論
第三章 豬偽狂犬病病毒耐熱保護(hù)劑篩選
    3.1 引言
    3.2 試驗(yàn)材料
        3.2.1 毒種及細(xì)胞
        3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)主要試劑
        3.2.3 主要保護(hù)劑
        3.2.4 儀器
    3.3 方法
        3.3.1 繁殖豬偽狂犬病病毒
        3.3.2 豬偽狂犬病病毒活疫苗凍干工藝流程
        3.3.3 保護(hù)劑基礎(chǔ)配方篩選
        3.3.4 Plackett-Burman 試驗(yàn)確定影響病毒凍干保護(hù)率的顯著因子
        3.3.5 Box-Burman 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化各保護(hù)劑基質(zhì)的濃度
        3.3.6 凍干驗(yàn)證試驗(yàn)
        3.3.7 疫苗耐老化試驗(yàn)
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 凍存試驗(yàn)結(jié)果
        3.4.2 凍干試驗(yàn)結(jié)果
        3.4.3 Plackett-Burman 設(shè)計(jì)及響應(yīng)值
        3.4.4 Plackett-Burman 方差分析
        3.4.5 Box-Behnken 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)值
        3.4.6 Box-Behnken 試驗(yàn)影響效果分析
        3.4.7 凍干驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
        3.4.8 耐老化試驗(yàn)結(jié)果
    3.5 小結(jié)
    3.6 討論
第四章 豬偽狂犬病病毒耐熱保護(hù)劑活疫苗凍干曲線(xiàn)優(yōu)化
    4.1 引言
    4.2 試驗(yàn)材料
        4.2.1 細(xì)胞、病毒液
        4.2.2 主要保護(hù)劑原料
        4.2.3 儀器
    4.3 方法
        4.3.1 共熔點(diǎn)測(cè)定
        4.3.2 凍干基本參數(shù)的擬定
        4.3.3 凍干曲線(xiàn)優(yōu)化
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 共熔點(diǎn)測(cè)定結(jié)果
        4.4.2 凍干基本參數(shù)的測(cè)定結(jié)果
        4.4.3 凍干曲線(xiàn)優(yōu)化結(jié)果
    4.5 小結(jié)
    4.6 討論
第五章 豬偽狂犬病病毒耐熱保護(hù)劑活疫苗安全性、效力檢驗(yàn)研究
    5.1 引言
    5.2 試驗(yàn)材料
        5.2.1 疫苗
        5.2.2 儀器與耗材
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.2.4 血清及細(xì)胞
    5.3 方法
        5.3.1 健康易感豬篩選
        5.3.2 疫苗安全性檢驗(yàn)
        5.3.3 疫苗效力檢驗(yàn)
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 健康易感豬篩選結(jié)果
        5.4.2 疫苗安全性檢驗(yàn)結(jié)果
        5.4.3 疫苗效力檢驗(yàn)結(jié)果
    5.5 小結(jié)
    5.6 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3756363