干擾素刺激基因在抗病毒及調(diào)節(jié)IFN信號(hào)通路的過程中具有重要作用。本課題組前期對犬瘟熱病毒(CDV)感染宿主前后全轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測序分析,發(fā)現(xiàn)干擾素刺激基因ISG15和IFIT2明顯上調(diào),為了進(jìn)一步探究ISG15和IFIT2對CDV感染的影響,本研究設(shè)計(jì)合成了犬源ISG15、IFIT2和持家基因GAPDH的特異性引物,分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增,構(gòu)建質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,建立熒光定量PCR檢測方法,并對該方法的特異性、靈敏性和重復(fù)性進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果表明,犬源ISG15、IFIT2和GAPDH的熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性R²均大于0.98,表明線性關(guān)系良好。ISG15、IFIT2和GAPDH的融解曲線均為單峰,擴(kuò)增產(chǎn)物單一,且峰值一致,表明建立的熒光定量PCR方法特異性良好。組內(nèi)與組間的變異系數(shù)均小于0.2%,表明該方法重復(fù)性較好。對CDV感染宿主細(xì)胞前后的ISG15和IFIT2 mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)CDV感染后ISG15和IFIT2的表達(dá)量升高,表明ISG15和IFIT2在CDV感染過程中發(fā)揮重要作用。該結(jié)果為針對CDV與干擾素抗病毒研究的開展提供重要的技術(shù)手段,并為進(jìn)一步揭...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞、病毒、菌種和載體
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設(shè)計(jì)
    1.4 PCR擴(kuò)增ISG15、IFIT2和GAPDH基因
    1.5 制備標(biāo)準(zhǔn)品
    1.6 SYBR Green Ⅰ real-time PCR反應(yīng)條件的確定
    1.7 Real-time PCR的應(yīng)用
2 結(jié)果
    2.1 犬源ISG15、IFIT2和GAPDH基因PCR擴(kuò)增結(jié)果
    2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及融解曲線分析
    2.3 Real-time PCR的重復(fù)性分析
    2.4 Real-time PCR的應(yīng)用
3 討論



本文編號(hào)：3752946