牛巴貝斯蟲病(Bovine babesiosis)，是由媒介蜱傳播的巴貝斯屬的多種病原引起的血液原蟲病，臨床主要表現(xiàn)為高熱、貧血、黃疸和血紅蛋白尿，嚴重感染時引起死亡。本病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，給家畜及畜產(chǎn)品國際貿(mào)易帶來嚴重危害，直接影響經(jīng)濟的發(fā)展。在我國，業(yè)已報道的牛的巴貝斯蟲病的病原有雙芽巴貝斯蟲、牛巴貝斯蟲、大巴貝斯蟲、卵形巴貝斯蟲、巴貝斯蟲未定種以及東方巴貝斯蟲共6種，其中牛巴貝斯蟲與雙芽巴貝斯蟲的發(fā)病率和致死率最高，危害嚴重，而兩者均以牛蜱屬的蜱種為媒介，臨床上常常表現(xiàn)為混合感染，目前尚無有效可行的血清學診斷方法可特異性地檢測牛巴貝斯蟲的感染。本研究以牛巴貝斯蟲為研究對象，采用原核表達系統(tǒng)克隆表達了牛巴貝斯蟲RAP-1的C端蛋白，并以此蛋白為抗原建立了ELISA鑒別檢測方法，并對我國13個省牛巴貝斯蟲病的流行情況進行了血清學調(diào)查。現(xiàn)將研究內(nèi)容總結如下： 1.利用原核表達載體pGEX-4T-1構建重組質(zhì)粒，在大腸桿菌BL21（DE3）pLysS中成功地表達獲得了RAP-1基因的C端肽段即BORCT。融合蛋白以GST為標簽，可溶性表達量為1.51mg/mL，Western-blo...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 病原學特征
    1.2 生活史
    1.3 病理學和致病機制
    1.4 超微結構
    1.5 牛巴貝斯蟲的入侵機制
    1.6 牛巴貝斯蟲的血清學診斷進展
        1.6.1 間接熒光抗體試驗（INDIRECT FLUORESCENT ANTIBODY TEST，IFAT）
        1.6.2 免疫印跡法（WESTERN BLOTTING）
        1.6.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY，ELISA）
    1.7 研究內(nèi)容
第二章 牛巴貝斯蟲 RAP-1 C 端基因的克隆、表達與鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 蟲體與血清
        2.1.4 實驗動物
    2.2 方法
        2.2.1 RAP-1 基因的生物信息學分析
        2.2.2 引物的設計與合成
        2.2.3 RAP -1 基因的 PCR 擴增
        2.2.4 RAP-1 基因與 pGEM-T Easy 載體的連接與轉化
        2.2.5 表達質(zhì)粒 pBORCT 的構建
        2.2.6 BORCT 的誘導表達
        2.2.7 重組蛋白的可溶性分析
        2.2.8 重組蛋白的純化
        2.2.9 重組蛋白的反應原性的檢測
    2.3 結果
        2.3.1 蛋白區(qū)段的生物信息學分析
        2.3.2 目的基因的克隆
        2.3.3 重組表達菌的誘導表達
        2.3.4 重組蛋白的 Western blot 鑒定
    2.4 討論
第三章 重組蛋白 BORCT 的間接 ELISA 方法的建立
    3.1 材料
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 抗原的制備
        3.1.4 血清的采集
    3.2 方法
        3.2.1 間接 ELISA 試驗程序
        3.2.2 ELISA 最佳反應條件的選擇
        3.2.3 ELISA 陽性閾值和特異性、敏感性的確定
        3.2.4 特異性實驗（交叉實驗）
        3.2.5 抗體動態(tài)曲線的評價
        3.2.6 野外樣品 ELISA 方法的評價
    3.3 結果
        3.3.1 ELISA 最佳反應條件的選擇
        3.3.2 ELISA 陽性閾值和異性、敏感性的確定
        3.3.3 特異性實驗（交叉實驗）
        3.3.4 抗體動態(tài)曲線的評價
        3.3.5 野外樣品對 ELISA 方法的評價
    3.4 討論
第四章 中國部分地區(qū)牛巴貝斯蟲的血清流行病學調(diào)查
    4.1 材料
        4.1.1 主要器材
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 抗原的制備
        4.1.4 血清的采集
    4.2 方法
    4.3 結果
    4.4 討論
第五章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3752510