Ezrin是連接細(xì)胞膜與細(xì)胞骨架的一種蛋白,在細(xì)胞膜重塑、細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞形態(tài)的維持等多種生命活動(dòng)均起到重要調(diào)節(jié)作用。磷酸化修飾是調(diào)控ezrin活性最重要的機(jī)制。目前已鑒定的調(diào)節(jié)ezrin功能的磷酸化位點(diǎn)有7個(gè)。已有的研究表明睪丸內(nèi)有ezrin表達(dá),并參與了哺乳動(dòng)物精子發(fā)生與獲能等過程。但睪丸內(nèi)ezrin表達(dá)有何規(guī)律?發(fā)生了哪些修飾?這些修飾又與精子發(fā)生及獲能有何關(guān)系?目前尚無確切論斷。本試驗(yàn)以ICR鼠為研究對(duì)象,應(yīng)用免疫熒光染色技術(shù)及熒光定量PCR技術(shù)對(duì)不同發(fā)育階段的公鼠睪丸以及不同發(fā)育時(shí)期育精子ezrin的表達(dá)水平進(jìn)行分析,總結(jié)其對(duì)小鼠精子發(fā)育尤其對(duì)精子獲能產(chǎn)生影響的作用規(guī)律,為闡明ezrin對(duì)哺乳動(dòng)物精子發(fā)生的分子機(jī)制奠定一定的基礎(chǔ)。研究主要分為三部分：1.Ezrin蛋白在小鼠睪丸中的定位在小鼠生精的時(shí)間基礎(chǔ)上,取1w齡(性成熟前)、7w齡(性成熟)及17w齡(成年期)公鼠的睪丸,進(jìn)行間接免疫熒光染色及免疫組織化學(xué)染色,分析ezrin在小鼠睪丸內(nèi)的定位規(guī)律,兩者結(jié)果均顯示：性成熟前ezrin主要定位于小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞,性成熟后ezrin不僅定位在間質(zhì)細(xì)胞,生...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
文獻(xiàn)綜述
    1 精子發(fā)生與獲能調(diào)控機(jī)制
        1.1 精子的發(fā)生機(jī)制
            1.1.1 有絲分裂期
            1.1.2 減數(shù)分裂期
            1.1.3 變態(tài)成形期
        1.2 精子發(fā)生的調(diào)控機(jī)制
            1.2.1 內(nèi)在因素
                1.2.1.1 轉(zhuǎn)錄因子基因
                1.2.1.2 熱休克基因
                1.2.1.3 周期蛋白基因
                1.2.1.4 核蛋白轉(zhuǎn)型基因
                1.2.1.5 細(xì)胞凋亡相關(guān)基因
            1.2.2 相互性
            1.2.3 外在因素
        1.3 精子獲能的調(diào)控機(jī)制
    2 Ezrin研究進(jìn)展
        2.1 ERM家族
        2.2 FERM結(jié)構(gòu)域
        2.3 Ezrin蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        2.4 Ezrin蛋白的組織分布與細(xì)胞定位
        2.5 Ezrin蛋白的活化
        2.6 Ezrin蛋白的生物學(xué)功能
        2.7 Ezrin蛋白與腫瘤的相關(guān)分子調(diào)控機(jī)制
    3 Ezrin蛋白在精子發(fā)生與獲能中的功能研究進(jìn)展
    4 目前存在的問題及研究方向
引言
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 主要耗材
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要試劑與藥品
        1.1.5 溶液配制
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 ezrin在小鼠睪丸中的定位
        1.2.2 ezrin在小鼠睪丸中轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平
        1.2.3 RNA完整性的檢測(cè)
        1.2.4 總RNA反轉(zhuǎn)錄
        1.2.5 引物的設(shè)計(jì)與合成
        1.2.6 熒光定量PCR
        1.2.7 小鼠附睪頭及附睪尾內(nèi)精子獲能及精子的間接免疫熒光染色
    1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1.3.1 Ezrin在不同性生理年齡段小鼠睪丸中的表達(dá)定位
        1.3.2 不同性生理年齡段小鼠睪丸ezrin mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)
        1.3.3 小鼠附睪頭精子獲能前后Ezrin蛋白表達(dá)及磷酸化修飾分析
        1.3.4 小鼠附睪尾精子獲能前后Ezrin蛋白表達(dá)及磷酸化修飾分析
    1.4 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 Ezrin蛋白在不同生理時(shí)期小鼠睪丸中的定位及表達(dá)規(guī)律
        2.1.1 免疫熒光染色檢測(cè)Ezrin在不同年齡段小鼠睪丸中的表達(dá)定位
        2.1.2 免疫組化染色檢測(cè)Ezrin蛋白在不同生理時(shí)期小鼠睪丸中的表達(dá)定位
        2.1.3 ezrin mRNA在不同生理時(shí)期小鼠睪丸中的轉(zhuǎn)錄水平
    2.2 附睪內(nèi)精子細(xì)胞獲能與未獲能組中w-Ezrin及p-Ezrin蛋白的表達(dá)
        2.2.1 附睪頭內(nèi)精子細(xì)胞獲能前后w-Ezrin及p-Ezrin蛋白的表達(dá)
        2.2.2 附睪尾內(nèi)精子細(xì)胞獲能前后w-Ezrin及p-Ezrin蛋白的表達(dá)
3 討論
    3.1 ezrin mRNA在小鼠睪丸中的轉(zhuǎn)錄水平
    3.2 Ezrin蛋白在小鼠睪丸中的定位規(guī)律
    3.3 Ezrin蛋白在小鼠精子獲能過程中的作用
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附表
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3750991