流產(chǎn)嗜性衣原體(Chlamydophila abortus, C. abortus)是引起豬、牛、羊等家畜流產(chǎn)、死胎等繁殖系統(tǒng)疾病的重要病原體,每年給畜牧養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟損失。同時,作為一種重要的人畜共患病原體,也給人類的公共衛(wèi)生安全帶來嚴重的危害。近幾年來的豬場流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明,我國豬場中衣原體流行相當(dāng)普遍。目前,豬場中都沒有使用衣原體疫苗進行免疫預(yù)防,因此檢測血清中抗體可以作為該病臨床診斷的重要依據(jù)。因此,本研究利用重組MOMP蛋白和單克隆抗體建立一種快速、簡便的阻斷ELISA抗體檢測方法,為臨床檢測提供技術(shù)支持。1.豬流產(chǎn)嗜性衣原體MOMP克隆表達 以豬流產(chǎn)嗜性衣原體HB1043株的全基因組DNA為模板,設(shè)計特異性引物進行PCR,擴增得到全長的MOMP基因,連接T載體并測序。對基因序列進行分析后,選擇271-1176bp進行克隆表達。構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET-28a-MOMP,轉(zhuǎn)化BL21進行誘導(dǎo)表達,并采用鎳離子親合層析柱對表達產(chǎn)物純化,得到34kDa的重組蛋白,經(jīng)Western-Blot檢測證實重組蛋白具有免疫學(xué)活性。 2. MOMP單克隆抗體制備 使用甲醛滅活的衣原體...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 衣原體概述
        1.1.1 衣原體分類
        1.1.2 主要生理特性
        1.1.3 衣原體危害
    1.2 豬流產(chǎn)嗜性衣原體病研究進展
        1.2.1 臨床癥狀及病理變化
        1.2.2 治療與預(yù)防
        1.2.3 主要抗原蛋白研究進展
        1.2.4 流行病學(xué)
    1.3 豬流產(chǎn)嗜性衣原體檢測技術(shù)研究進展
        1.3.1 傳統(tǒng)檢測
        1.3.2 分子生物學(xué)檢測
        1.3.3 血清學(xué)檢測
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 病原、血清、細胞及試驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 主要儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 豬流產(chǎn)嗜性衣原體MOMP克隆表達
        2.2.2 MOMP單克隆抗體制備
        2.2.3 單克隆抗體酶標(biāo)
        2.2.4 阻斷ELISA抗體檢測方法建立
3 結(jié)果與分析
    3.1 MOMP克隆表達結(jié)果
        3.1.1 目的基因擴增及分析
        3.1.2 誘導(dǎo)表達與純化
        3.1.3 Western-Blot檢測
        3.1.4 間接ELISA包被濃度與血清稀釋度選擇
        3.1.5 臨界值確定
    3.2 MOMP單克隆抗體制備
        3.2.1 小鼠免疫后效價檢測
        3.2.2 雜交瘤細胞染色體計數(shù)
        3.2.3 型分析
        3.2.4 腹水效價檢測
        3.2.5 腹水純化
    3.3 單抗酶標(biāo)
    3.4 阻斷ELISA抗體檢測方法建立
        3.4.1 參考血清效價檢測
        3.4.2 抗原包被及酶標(biāo)單抗工作濃度選擇
        3.4.3 血清稀釋度選擇
        3.4.4 酶標(biāo)單抗反應(yīng)時間
        3.4.5 血清反應(yīng)時間
        3.4.6 臨界值確定
        3.4.7 交叉反應(yīng)
        3.4.8 重復(fù)性
        3.4.9 符合性
        3.4.10 穩(wěn)定性
4 討論
    4.1 抗原蛋白的選擇
    4.2 表達載體的選擇
    4.3 單克隆抗體制備
    4.4 阻斷ELISA方法
5 結(jié)論
參考文獻
附錄1
附錄2
致謝



本文編號：3745464