為了探究感染朊病毒后含纈酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)的變化情況及其對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)信號(hào)通路的影響,試驗(yàn)采用細(xì)胞免疫熒光和實(shí)時(shí)熒光定量PCR等方法分析朊病毒感染的細(xì)胞系中VCP及其基因表達(dá)情況;Western-blot方法檢測(cè)朊病毒感染的細(xì)胞、小鼠腦組織中VCP含量變化,白藜蘆醇動(dòng)態(tài)清除朊蛋白(prion protein,PrP)的SMB-S15細(xì)胞、PrP重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-Cyto-PrP瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞、蛋白酶體抑制劑MG-132處理的SMB-S15細(xì)胞中VCP的表達(dá)情況,以及朊病毒感染的細(xì)胞系中ERAD信號(hào)通路關(guān)鍵因子的表達(dá)水平。結(jié)果表明:與對(duì)照組相比,在朊病毒感染的細(xì)胞中VCP及基因表達(dá)水平差異不顯著(P>0.05);在終末期小鼠腦組織中VCP表達(dá)水平差異不顯著(P>0.05);經(jīng)動(dòng)態(tài)清除PrP、細(xì)胞內(nèi)聚集PrP以及MG-132處理后,VCP表達(dá)水平均差異不顯著(P>0.05);在朊病毒感染細(xì)胞...

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【文章目錄】：
1 材料
    1.1 動(dòng)物腦組織及細(xì)胞系
    1.2 質(zhì)粒
    1.3 主要試劑
    1.4 主要儀器
2 方法
    2.1 朊病毒感染細(xì)胞中VCP分布及表達(dá)量檢測(cè)
    2.2 朊病毒感染細(xì)胞中VCP基因表達(dá)水平檢測(cè)
    2.3 感染朊病毒后VCP與ERAD信號(hào)通路關(guān)鍵因子檢測(cè)
        2.3.1 朊病毒感染細(xì)胞及腦組織中VCP含量檢測(cè)
        2.3.2 朊病毒與VCP相互作用分析
        2.3.3 蛋白酶體異常對(duì)泛素和VCP含量的影響
        2.3.4 朊病毒感染細(xì)胞中ERAD信號(hào)通路關(guān)鍵因子含量檢測(cè)
    2.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 朊病毒感染細(xì)胞中VCP分布及表達(dá)量檢測(cè)
    3.2 朊病毒感染細(xì)胞中VCP基因表達(dá)水平檢測(cè)
    3.3 感染朊病毒后VCP與ERAD信號(hào)通路關(guān)鍵因子檢測(cè)
        3.3.1 朊病毒感染細(xì)胞及腦組織中VCP含量檢測(cè)
        3.3.2 朊病毒與VCP相互作用分析
        3.3.3 蛋白酶體異常對(duì)泛素和VCP含量的影響
        3.3.4 朊病毒感染細(xì)胞中ERAD信號(hào)通路關(guān)鍵因子含量檢測(cè)
4 討論
5 結(jié)論



本文編號(hào)：3744200